Thèse soutenue

Caractérisation physicochimique des complexes plasmide-peptide cationique et leur internalisation dans diverses lignées cellulaires tumorales humaines
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Auteur / Autrice : Arezki Tagounits
Direction : Mahmoud Ghomi
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biophysique moléculaire
Date : Soutenance en 2011
Etablissement(s) : Paris 13

Résumé

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A l’aide de plusieurs méthodes physicochimiques et biologiques, nous avons pu analyser la capacité de trois peptides cationiques minimalistes de familles LK et LR (où L : leucine, K : lysine, R : arginine) à interagir avec l’ADN plasmidique et à faciliter son l’internalisation dans diverses lignées cellulaires tumorales humaines. La complexation de trois peptides, deux 15-mères (LK15 et LR15) et un 19-mère (LK19) avec les plasmides, a été prouvée par électrophorèse sur gel d’agarose en fonction du ratio de charge peptide-plasmide. Les points isoélectriques ont été déterminés par mesures du potentiel zêta et la taille des particules formées en solution, a été estimée par diffusion de la lumière. Les spectres de dichroïsme circulaire et Raman ont pu fournir des informations quant à la structure secondaire des partenaires et des sites d’interactions dans leur assemblage. Par ailleurs, nous avons pu montrer que l’efficacité de la transfection cellulaire dépend du peptide utilisé et s’améliore dans le sens : LK15 < LK19 < LR15. L’influence d’autres paramètres comme le ratio de charge (+/-), la taille des plasmides, et le type cellulaire sur les niveaux de transfection, a été également discutée. Le facteur relevant à mentionner est la faible cytotoxicité de ces peptides, en particulier des 15-mères. L’implication de plusieurs voies d’endocytose ainsi que le rôle majeur des glycosaminoglycanes dans le mécanisme d’internalisation, ont été également discutés.