Regulation de la nadph oxydase phagocytaire par la pat1 « protein interacting with app tail 1

Regulation of the phagocyte NADPH oxidase by a novel interaction between p22phox and PAT1

• Auteur / Autrice : Riad Arabi Derkawi
• Direction : Marie-Anne Gougerot-Pocidalo, Jamel El Benna
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Immunologie
• Date : Soutenance le 21/10/2011
• Etablissement(s) : Paris 11
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Signalisations et réseaux intégratifs en biologie (Le Kremlin-Bicêtre, Val-de-Marne ; 2000-2015)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Centre de recherche biomédicale Bichat-Beaujon - Centre de recherche biomédicale Bichat-Beaujon
• Jury : Président / Présidente : Jean-Claude Drapier
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Jamel El Benna, Marie-Hélène Paclet, Michel Mallat, Sylvie Chollet-Martin
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Marie-Hélène Paclet, Michel Mallat

Mots clés

Mots clés contrôlés

Espèces réactives de l'oxygène

Phagocytes

NADPH oxydase

Mots clés libres

NADPH oxydase

Phagocytes

Formes réactives de l’oxygène

PAT1/APPBP2

P22phox

NADPH oxidase

Phagocytes

Reactive oxygen species

PAT1/APPBP2

P22phox

Résumé

Ce travail montre qu’une protéine non encore décrite dans les phagocytes, la PAT1 « Protein interacting with APP Tail 1 », interagit avec la partie cytosolique de la p22phox (composant du cytochrome b558 membranaire de la NADPH oxydase). Nous avons utilisé différentes approches pour montrer cette interaction : le système double hybride, la technique de GST-pull down, la microscopie confocale et la technique de co-immunoprécipitation. De plus, nous avons montré que la PAT1a recombinante augmente l’activité de la NADPH oxydase, in vitro dans un système acellulaire reconstitué, et dans les cellules intactes (monocytes et cellules COS-phox). Cette nouvelle interaction régule donc l’activation de la NADPH oxydase et la production des FRO. Par ailleurs, la liaison de PAT1 aux microtubules pourrait favoriser l’assemblage du complexe NADPH oxydase pendant son activation. Ceci pourrait conduire à l’identification de nouvelles cibles thérapeutiques qui préviennent la survenue des lésions tissulaires dans les maladies inflammatoires.

Reactive oxygen species (ROS) production by the phagocyte NADPH oxidase plays a crucial role in host defenses. NADPH oxidase is composed of the membrane flavocytochrome b558 components (p22phox and gp91phox/NOX2), and cytosolic components (p40phox, p47phox, p67phox and a small GTPase Rac1 or Rac2). In this work we identified PAT1 by double hybrid system as a potential partner of p22phox. The interaction between p22phox and PAT1a was further confirmed by in vitro GST pull-down assay, confocal microscopy and co-immunoprecipitation. Addition of recombinant PAT1a to the cell free-system enhanced NADPH oxidase activation and it’s over-expression in human monocytes and in COSphox cells increased ROS production in resting and fMLP-stimulated cells.These data clearly identify PAT1 as a novel regulator of NADPH oxidase activation in phagocytes.Inhibition of p22phox/PAT1 interaction could be used as new approach to limit ROS production by phagocytes at inflammatory sites.