Sur la route d'un virus recombinant EMCV-FMDV

On the way to an EMCV-FMDV recombinant virus

• Auteur / Autrice : Margot Carocci
• Direction : Labib Bakkali Kassimi
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie et virologie
• Date : Soutenance en 2011
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Souris

Apoptose

Délétion de séquence

Protéines mutantes

Réplication virale

Virus de l'encéphalomyocardite

Résumé

La Fièvre Aphteuse est une maladie animale très contagieuse à fortes répercussions économiques. L'agent responsable, FMDV, un picornavirus, se réplique et dissémine rapidement. Ce projet de thèse consiste à produire un virus recombinant chimère EMCV-FMDV utilisable comme vaccin vivant atténué marqueur contre FMD. Son génome sera constitué de régions codant les protéines non structurales du virus de l’encéphalomyocardite (EMCV), celles qui codent les protéines de capside seront issues du FMDV. Dans le but d'atténuer la virulence de l'EMCV, une délétion dans la protéine 2A a été introduite. L'étude du virus délété, EMCV1. 26Δ2A, a permis de montrer qu'il entraine la mort des cellules par apoptose contrairement au virus sauvage, suggérant que la protéine 2A de l'EMCV est nécessaire à l'inhibition de l'apoptose. De plus, nous avons pu montrer que le virus EMCV1. 26Δ2A était fortement atténué in vitro et in vivo, et qu'il protège efficacement des souris contre une dose létale du virus sauvage. Nos résultats indiquent que ce virus est un bon candidat comme vaccin vivant atténué contre l'EMCV et une base sûre pour la conception du virus chimère EMCV-FMDV. La production de ce virus recombinant chimère a nécessité plusieurs étapes de clonage qui ont permis d'obtenir un plasmide contenant un ADNc génomique EMC V1. 26 A2 A-PI FMDV (pMCl). Après transfection de pMCl, la production d'antigènes de capside FMDV a pu être détectée mais ces premiers essaies n'ont pas permis d'obtenir de virus infectieux. La formation de particules virales recombinantes ou les éventuelles étapes limitantes du cycle viral restent à déterminer mais les résultats obtenus jusque là sont encourageants et prometteurs.

Foot and Mouth Disease is a highly contagious animal disease with important economic impacts. The causative agent, FMDV, a picornavirus, replicates and spreads extremely rapidly. The recent outbreaks in countries previously FMD-free demonstrated the need to develop control strategies to stop or at least slow the spread of the virus. The aim of this project is to develop a safe recombinant virus that would be made of FMDV capsid proteins, and the non structural proteins of the Encephalomyocarditis virus (EMCV). This recombinant virus will serve as a marker vaccine against FMD. In order to attenuate EMCV virulence, a deletion in the 2A protein was introduced. Study of EMCV1. 26 Δ 2A virus showed that it causes cell death by apoptosis in contrast to the wild type, suggesting that the EMCV 2A protein is necessary to inhibit apoptosis. Moreover, we have shown that EMCV1. 26 Δ 2A virus was strongly attenuated in vitro as in vivo, and efficiently protected mice after challenge with a lethal dose of wild type virus. Our results indicate that this virus is a good candidate for a live attenuated vaccine against EMCV and a safe base for the production of the EMCV-FMDV chimera virus. The production of this recombinant chimera virus required several cloning steps, leading to the construction of the EMC VA2 Δ -PI FMDV genomic cDNA (pMCl). The first attempts to produce recombinant virus EMC V Δ 2A-P1 FMDV allowed detection of FMDV capsid antigens, but did not succeed yet to produce infections recombinant virus. The formation of recombinant viral particles or the eventual limiting steps of the viral cycle remain to be determined. However, the results obtained up to now are heartening and promising.