Identification de lipoprotéines chez Enterococcus faecalis et étude de leur implication dans la réponse au stress et la virulence de ce pathogène opportuniste : Thèse soutenue sur un ensemble de travaux

Identification of lipoproteins in Enterococcus faeacalis and study of their involvement in stress response and virulence of this opportunist pathogen

• Auteur / Autrice : Fany Reffuveille
• Direction : Alain Rincé, Sylvie Chevalier-Laurency
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
• Date : Soutenance en 2011
• Etablissement(s) : Caen

Mots clés

Mots clés contrôlés

Stress oxydatif

Virulence (microbiologie)

Lipoprotéines

Entérocoques

Résumé

Dans cette étude, nous nous sommes intéressés à l’analyse de lipoprotéines chez un pathogène opportuniste, responsable d’infections nosocomiales : E. Faecalis. Par une analyse in silico, nous avons identifié 90 lipoprotéines chez cette bactérie à Gram positif. Près de la moitié sont des composants de transporteurs de type ABC et plus d’un tiers pourraient être impliquées dans la virulence. L’importance des lipoprotéines dans la réponse au stress et dans la virulence a été démontrée grâce à la construction et à l’étude de mutants affectés au niveau des gènes lgt et/ou lsp codant les 2 enzymes responsables de la maturation des lipoprotéines. Nous avons montré que la peptidase Eep ne pouvait pas cliver le peptide signal de la lipoprotéine EF0685 en absence de Lsp. L’étude de deux peptidyl-prolyl cis/trans isomérases (PPiases) extracellulaires (EF0685 et EF1534) a montré que le bon repliement des protéines de surface ou sécrétées par ces lipoprotéines est important pour la réponse au stress et la virulence. Ces deux enzymes sont importantes pour la colonisation des reins chez la souris et une réduction de la cytotoxicité cellulaire a été observée chez le mutant ef0685. En revanche, la PPiase intracellulaire EF2898 n’est pas impliquée dans la virulence.

In this study, we were interested in the analysis of lipoproteins in an opportunistic pathogen, responsible for nosocomial infections: E. Faecalis. Using in silico analysis, we identified 90 lipoproteins in this Gram-positive bacterium. Nearly half are components of ABC transporters and more than a third might be involved in virulence. The importance of lipoproteins for stress response and virulence was demonstrated through the construction and the study of mutants affected in lgt and/or lsp genes that encode the 2 enzymes responsible for lipoprotein maturation. We have shown that the Eep peptidase could not cleave the EF0685 lipoprotein signal peptide in the case Lsp is absent. The study of two extracellular peptidyl-prolyl cis/trans isomerases (PPiases : EF0685 and EF1534) showed that the correct folding of surface or secreted proteins by these lipoproteins is important for stress response and virulence. These two enzymes are important for colonization of kidneys in mice and a reduction in cellular cytotoxicity was observed for the ef0685 mutant. However, the intracellular PPiase EF2898 is not involved in virulence.