Rôles biologiques de la voie de signalisation intracellulaire ERK 1/2 induite par un alphaherpèsvirus, le virus de la pseudorage, au cours du cycle lytique

Biological roles of the ERK 1/2 signaling pathway activated during the lytic cycle of an alphaherpesvirus, the pseudorabies virus

• Auteur / Autrice : Violaine Massip
• Direction : François Lefèvre
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Virologie. Immunologie
• Date : Soutenance en 2010
• Etablissement(s) : Versailles-St Quentin en Yvelines

Mots clés

Mots clés contrôlés

Mitogen-Activated Protein Kinases

Réplication virale

Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases

Porc -- Viroses

Maladie d'Aujeszky

Virus de la maladie d'Aujeszky

Chez les animaux

Infections à herpesviridés

Résumé

Le virus de la pseudorage (PrV), un alphaherpèsvirus, constitue un bon modèle pour étudier les voies de signalisation viro-induites et leurs effets sur la réplication virale et l'immunité innée. De nombreux virus activent, au cours de l'infection, la voie ERK 1/2 généralement au profit de la réplication virale. Cependant, les mécanismes sous-jacents sont souvent peu connus. Nous démontrons ici que le PrV induit la voie ERK 1/2 de façon précoce et transitoire. Pour étudier les effets de cette activation sur le cycle viral et la cellule infectée nous l'ovons bloqué avec un inhibiteur spécifique de la voie, le U0126 : nous avons observé un blocage de la production des virions infectieux intracellulaires et extracellulaires démontrant ainsi que cette activation est requise au cours du cycle viral. De plus, nous avons remarqué une forte inhibition de la réplication de l'ADN viral dans les cellules infectées et une diminution de la synthèse des protéines virales. De façon intéressante, il est possible de réactiver le cycle viral en présence de U0126 par l'adjonction de sérum de veau foetal 18h après l'infection. Ceci indique que les cellules infectées gardent leur habilité à produire des virions malgré le blocage de la voie ERK et que la stimulation sérique surpasse les effets du blocage de la voie. Les effets de ce blocage observés dans notre modèle fournissent une bonne opportunité pour étudier les fonctions modulées par la voie ERK au cours de l'infection. Pour les identifier, nous avons developpé une approche transcriptomique visant à comparer le transcriptome des cellules infectées en présence ou non de l'inhibiteur.

Pseudorabies virus (PrV), an alphaherpesvirus, represents a good model to study herpesvirus-induced signaling pathways and their effects on viral replication and innate immune response. Many viruses activate, during infections, the ERK 1/2 pathway wich generally stimulates viral replication. However, the cellular mechanisms involved remain poorly understood. We demonstrate here that PrV induces at high MOI in porcine PK15 cells, early and transient ERK 1/2 activation. To investigate more deeply the effects of this activation on the viral cylce and infected cells, we blocked it with the specific inhibitor U0126 : we observed a blockade of extracellular and intracellular infectious virions production thus demonstrating requirement of ERK 1/2 activation for viral cycle achievement. Moreover, we noticied no significant effect on incoming virion DNA nuclear entry in early viral cycle, but a strong inhibition of viral DNA replication in infected cells and decrease of viral protein synthesis. Interestingly, it was possible to reactivate the viral cycle in presence of U0126 : addition of feta calf serum 18h p. I. Resulted in increased extracellular virus titers reaching normal levels in the next 12h. This indicated that infected cells kept their ability to produce virions despite ERK 1/2 blockade and that serum stimulation overrides this blockade. The effects of ERK 1/2 blockade observed in our model provide a good opportunity to study the cellular functions modulated during viral infection by this pathsway. To identify them, we are developing global microarray approache comparing at different time p. I. The transcriptome of PrV-infected cells in the presence or absence of U0126.