Sondes fluorogéniques pour la détection et l'étude de la dynamique de protéines cellulaires

Fluorogenic probes for the detection and the investigation of the cellular protein dynamics

• Auteur / Autrice : David Puliti
• Direction : Maurice Goeldner
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie bioorganique
• Date : Soutenance en 2010
• Etablissement(s) : Strasbourg

Mots clés

Mots clés contrôlés

Microscopie de fluorescence

Sondes fluorescentes

Protéomique

Fluorescence

Oxydoréduction

Dérivés

Coumarines

Protéines -- Marquage par affinité

Chimie click

Résumé

Le marquage fluorescent de protéines permet, à travers les techniques de microscopie à fluorescence, d'étudier des mécanismes du vivant au niveau moléculaire. La localisation intracellulaire de protéines par microscopie confocale à fluorescence, ou le suivi en temps réel de l'expression de protéines, exprimés en protéines de fusion avec des protéines autofluorescentes, constituent des pratiques routinières en chimie biologique. Mais malgré la grande quantité d'informations que nous livrent les sondes autofluorescentes, il reste difficile, avec des sondes classiques de visualiser une dynamique moléculaire intracellulaire, comme par exemple l'interaction entre deux protéines, ou bien la diffusion d'une protéine à travers le cytoplasme. Le présent travail de doctorat propose des pistes pour l'élaboration de nouvelles sondes fluorescentes et fluorogéniques à squelette coumarinique, pour l'étude dynamique de protéines cellulaires. Les pistes de développement explorées ont recours à des concepts aussi divers que: La ClickChemistry, le SNAPtag, le transfert d'électrons photoinduit, la reconnaissance entre un HIStag et un motif NTA. . .

Fluorescent protein labeling, and confocal fluorescent microscopy allow us to investigate the mechanisms of life on the molecular level in a non invasive way. Applications, such as the fluorescent localization of proteins in the cytoplasm, or real time monitoring of protein expression, are already well established techniques in the field of chemical biology. Yet, despite all advantages of classical fluorescence labeling techniques, there is still a lack of fluorescence techniques, that allow an insight into the dynamics of proteins. This work discusses a few lines of development which are meant to contribute to the development of such dynamic fluorescent tools. The synthesis and characterization of fluorescent and fluorogenic probes is discussed. Key Concepts: Click Chemistry, SNAPtag, photoinduced electron transfer, recognition between a HIStag and an NTA moiety. . .