Conséquences fonctionnelles et pathologiques de la phosphorylation de la protéine neuronale Tau impliquée dans la maladie d’Alzheimer

Functional and pathological consequences of the phosphorylation of the neuronal protein Tau involved in Alzheimer’s disease

• Auteur / Autrice : Laziza Amniai
• Direction : Guy Lippens, Isabelle Landrieu
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie et de la santé
• Date : Soutenance le 30/03/2010
• Etablissement(s) : Lille 1
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Biologie-Santé (Lille ; 2000-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Unité de glycobiologie structurale et fondamentale (UGSF)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Maladies neurodégénératives

Microtubules

Spectroscopie de la résonance magnétique nucléaire

Kinases dépendantes des cyclines

Phosphorylation

Protéines kinases

Mots clés libres

Protéine Tau

Transfert d'énergie observé par fluorescence

Résumé

A l’heure actuelle, le processus neurodégénératif responsable de la MA n’est pas complètement élucidé et ses causes sont probablement multiples. Cependant, on sait qu’il met en jeu Tau, une protéine associée aux microtubules et qui permet leur stabilisation ; dans les cerveaux des patients Alzheimer, Tau est présente sous un état anormalement phosphorylée, agrégeant en filaments appariés en hélice à l’intérieur des neurones. Notre modèle d’étude in vitro consiste en une protéine Tau recombinante phosphorylée par la CDK2/CycA3 sur deux phosphoépitopes spécifiques à la MA et reconnus par les anticorps AT8 et AT180. Ce profil de phosphorylation a été caractérisé de façon qualitative et quantitative par spectroscopie RMN (Résonance Magnétique Nucléaire). Nous avons ensuite tenté de cartographier ces phosphoépitopes par deux techniques complémentaires originales : la RMN et le FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer). Nous avons également montré que l’(hyper)phosphorylation de Tau ne menait pas forcément à son détachement des microtubules, hypothèse largement répandue dans la littérature. Finalement, nous avons pu mettre en évidence une interdépendance entre les deux phosphoépitopes AT8 et AT180 lors de la déphosphorylation de notre échantillon de protéine Tau phosphorylée par PP2AT55, une phosphatase trimérique majeure du cerveau.

The neurodegenerative process responsible for Alzheimer’s disease is not yet elucidated and its causes are probably multiple. Nevertheless, we know that it brings into play Tau, a microtubule associated protein that allows their stabilization; in Alzheimer patients’ brain; Tau proteins are present under an abnormally hyperphosphorylated state which aggregate in paired helical filaments inside the neurons. Our in vitro study model is based on a recombinant Tau protein phosphorylated by CDK2/CycA3 on two Alzheimer’s disease specific phosphoepitopes recognized by AT8 and AT180 antibodies. This phosphorylation pattern was qualitatively and quantitatively characterized by NMR (Nuclear Magnetic Resonance) spectroscopy. We tried then to map these phosphoepitopes by two original and complementary methods NMR and FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer). We also showed that (hyper)phosphorylation of Tau doesn’t lead necessarily to its detachment from microtubules, a hypothesis widely spread in literature. Finally, we highlighted that during the dephosphorylation of our phospho-Tau sample by PP2AT55, a major trimeric phosphatase in brain, the dephosphorylation of AT8 phosphoepitope was under AT180 phosphorylation status control.