Thèse soutenue

Conception d'un système protéique pour le ciblage de vecteurs non viraux au niveau des gènes codant les ARN ribosomiques

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Auteur / Autrice : Elodie Carnus
Direction : Yves Bigot
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences de la vie
Date : Soutenance le 05/11/2009
Etablissement(s) : Tours
Ecole(s) doctorale(s) : Ecole doctorale Santé, sciences, technologies (Tours)
Partenaire(s) de recherche : Equipe de recherche : SST/FRE CNRS 2969 - Laboratoire d'Etude des parasites Génétiques
Jury : Président / Présidente : Denis Rasschaert
Examinateurs / Examinatrices : Chantal Vaury, Chamsy Sarkis
Rapporteurs / Rapporteuses : Daniel Locker, Jacques Mallet

Résumé

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Le principal défi des techniques de transfert de gènes est de garantir l’expression du gène d’intérêt tout en assurant l’innocuité des cellules génétiquement modifiées. La plupart des systèmes d’intégration, dérivés des transposons, assurent une intégration aléatoire au sein du génome de la cellule. L’enjeu de ce travail est de développer des outils permettant de cibler l’intégration du transgène au niveau d’un locus choisi dans le but d’améliorer la biosécurité. L’étude s’est portée sur l’utilisation des protéines à ZFD (Zinc Finger Domain) pour leur aptitude à être conçues à façon, in silico, en utilisant les nombreuses ressources disponibles sur Internet. Pour comparer, les propriétés de deux domaines de liaison, NterR2P, provenant de deux rétrotransposons R2 de type non-LTR, ont été étudiées pour leur capacité naturelle à reconnaître spécifiquement une région de 100 pb située dans l’ADN ribosomique 28S. Les résultats obtenus ont montré que les domaines NterR2P reconnaissent spécifiquement leur ADN cible avec une forte affinité de liaison. Deux protéines de fusion, utilisant le domaine NterR2P, ont ensuite été synthétisées dans le but d’intégrer le transgène au niveau de l’ADNr en utilisant le transposon Sleeping Beauty. L’idée originale de ce travail est de réaliser l’intégration du transgène via le ciblage indirect du transposon, ou de la transposase sans que celle-ci ne soit modifiée. L’impact de ces systèmes de ciblage sur les cellules nécessite de réexaminer une telle stratégie.