Thèse soutenue

Analyse fonctionnelle du promoteur de la cembrane-triène-ol-synthase spécifique des trichomes de Nicotiana sylvestris
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Auteur / Autrice : Hanane Ennajdaoui
Direction : Michel HerzogGilles Vachon
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie cellulaire
Date : Soutenance en 2009
Etablissement(s) : Grenoble 1

Mots clés

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Mots clés libres

Résumé

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Chez le tabac, les tri chomes glandulaires sécréteurs (TGSs) sont des structures pluricellulaires où s'effectuent la synthèse et la sécrétion de nombreux composés volatiles. Cette production spécifique de composés volatiles dans les TGSs est la conséquence de la spécificité de l'expression transcriptionnelle des gènes des Terpènes synthases. Les promoteurs de ces gènes sont d'un grand intérêt parce qu'ils peuvent être utilisés en bioingénieurie pour produire des biomolécules à forte valeur ajoutées (taxol, l'artémisinine, sentalol) dans TGSs. Le promoteur de la Cembratriène¬diol-synthase (PIlNsTPS02a) a été isolé et transfecté dans N. Sylvestris. Ce promoteur est très actif dans les cellules de têtes des TGSs. L'analyse par délétions du promoteur a montré que deux fragments, 4c (1 OOpb) et 400c (360 pb) sont importants pour l'expression spécifique dans les têtes de trichomes. La région de 4c a été placée en amont du promoteur 35S minimum (-46) et du gène rapporteur GUS. Nous avons ainsi démontré que cet élément est nécessaire et suffisant pour une expression dans les têtes de TGSs. Le fragment 400c pourrait jouer un rôle dans la répression du PIlNsTPS02a dans les cellules épidermiques et dans certaines parties des racines. Enfin, nous avons isolé par crible simple-hybride dans la levure un facteur de transcription putatif du trichome (NsZnF) qui pourrait reconnaître le fragment 400c. Cette protéine appartient à la famille des facteurs de transcription GAT A-ZincFinger. L'analyse bioinformatique a montré l'existence d'un doigt de zinc (domaine de fixation à l'ADN), d'un domaine CCT (localisation nucléaire) et un domaine TIF Y potentiellement impliqué dans l'homodimérisation. L'expression transitoire dans N. Benthamiana montre une localisation nucléaire de NsZnf compatible avec son rôle de facteur de transcription. Ces travaux devraient permettre une meilleure compréhension des mécanismes de régulation transcriptionelle dans les TGSs et pourront servir au développement d'outils de production en bioingénieurie.