Identification de protéines impliquées dans le tri aux endosomes multivésiculaires : Une voie utilisée dans le bourgeonnement du VIH-1

Identification of proteins involved in multivesicular body sorting : A pathway used in HIV-1 budding

• Auteur / Autrice : Vanessa Addis
• Direction : Sylvie Friant
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et moléculaire
• Date : Soutenance en 2008
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Mots clés

Mots clés contrôlés

VIH (virus)

Saccharomyces cerevisiae

Protéines membranaires

Endosomes

Résumé

L’endosome tardif ou MVB (MultiVesicular Body) est une station de tri protéique majeure dans les voies du trafic intracellulaire. La formation et le tri au MVB sont deux mécanismes liés qui font intervenir les Epsines, plusieurs complexes protéiques, appelés ESCRTs (Endosomal Sorting Complex Required for Transport), ainsi que les phosphoinositides membranaires (PtdIns) PtdIns(3)P et PtdIns(3,5)P2. Les Epsines sont des protéines caractérisées par un domaine ENTH (Epsin N-terminal homology) en N-terminal, qui est un module de liaison à des phosphoinositides membranaires. Notre laboratoire a montré que Ent3 et Ent5, deux Epsines de levure Saccharomyces cerevisiae, sont des effecteurs spécifiques du PtdIns(3,5)P2 aux endosomes. Elles sont nécessaires au tri des protéines membranaires au MVB et interagissent avec Vps27/Hrs de ESCRT-0 dans différents complexes de 500 kDa. Pour identifier les autres protéines appartenant à ces complexes, Ent3 et Ent5 ont été utilisées en tant qu’appât dans un crible protéomique de puces à protéines, détectant les interactants directs. Parmi eux, nous avons trouvé une protéine non caractérisée de 70 kDa, que nous avons nommé Vps76. Les levures vps76Δ possèdent un défaut spécifique de tri au MVB des cargos ubiquitinés et PtdIns(3,5)P2-dépendant. Nous proposons que Vps76 est essentielle au tri protéique au MVB et qu’elle agit comme un senseur de la machinerie de tri au MVB chez la levure.

Late endosome or multivesicular body (MVB) is the major sorting station of the intracellular membrane trafficking pathway. MVB formation and sorting are two linked mechanisms which require Epsins, different protein complexes called ESCRTs (Endosomal Sorting Complex Required for Transport) and of membrane lipid phosphoinositides (PtdIns) PtdIns(3)P and PtdIns(3,5)P2. Epsins are proteins characterized by an ENTH domain (Epsin N-terminal homology) that is a membrane phosphoinositide-binding module. Our laboratory showed that two yeast Saccharomyces cerevisiae Epsins, Ent3 and Ent5, are specific PtdIns(3,5)P2 effectors at the endosome. They are required for proteins sorting at the MVB and interact with the Vps27/Hrs ESCRT-0 into different proteins complexes around 500 kDa. To determine additional proteins that are present in these complexes, Ent3 and Ent5 were used as baits in a poteome protoarray screen, determining their direct interactors. Among these many, we found an uncharacterized 70 kDa protein, we named Vps76. The vps76Δ cells display a specific MVB sorting defect of ubiquitinated- and PtdIns(3,5)P2-dependent cargos. We propose Vps76 is required for MVB sorting and is acting as a “sensor” of the multivesicular body sorting machinery in yeast.