Développement et application d'un nouveau marqueur fluorescent pour les tests sur phase solide

Development and application of a new fluorescent marker for solid phase tests

• Auteur / Autrice : Nathalie Khreich
• Direction : Christophe Créminon
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Pharmacie
• Date : Soutenance en 2008
• Etablissement(s) : Paris 11

Mots clés

Mots clés contrôlés

Marqueurs biologiques

Bioterrorisme

Microcystines

Mots clés libres

Immunoliposomes

Dosage enzymoimmunologique

Enterotoxine B staphylococcique

Microcystines

Test immunochromatographique sur bandelette

Nodularines

Résumé

Pour lutter contre le bioterrorisme, notre laboratoire a décidé de développer un système de détection par immunochromatographie ''de type bandelette'' (ICT), utilisable sur le terrain. Ce format utilise des traceurs (anticorps sur lesquels sont fixées des molécules permettant d'obtenir un signal) afin de détecter la présence de la molécule d'intérêt. Le but de ma thèse a été de développer des traceurs à forte activité spécifique, pour augmenter la sensibilité des ICTs. Dans un premier chapitre, la sélection des immunoliposomes comme traceurs fluorescents est effectuée en utilisant l'entérotoxine B de S. Aureus. L'application de ce marqueur à des ICTs pour des petites molécules est ensuite étudiée dans un deuxième chapitre en utilisant la microcystine, toxine produite par les cyanobactéries. Enfin, l'application de ces marqueurs en immunoempreinte est développée dans un troisième chapitre, montrant la possibilité d'obtenir une détection multiplexe simple et rapide sur la même membrane.

To fight against the bioterrorism, our laboratory decided to develop new assay formats applied to the agents of the biological threat, in particular an immunochromatographic test (ICT) also called ''test strip assay''. This format uses tracer (antibody conjugated to molecules allowing to obtain a signal) in order to detect the presence of the molecule of interest. The goal of my thesis was to develop original tracers, with high specific activity, usable for this test. At first, selection of the immunoliposomes as fluorescent tracers fot ICTs is carried out using the detection of staphylococcus enterotoxin B as a model. The application of this marker to ICTs detecting small molecules is then applied to the microcystines, toxins produced by the cyanobacteria. Lastly, the application of these markers in western blot is developed in a third and final chapter, showing the possibility to obtain a simple and fast multiplex detection on the same blot.