Régulation de l'adressage et de la fonction du transporteur d'ammonium RhBG par phosphorylation et liaison à l'ankyrine G

Phosphorylation and ankyrin-g binding of the c-terminal domain regulate targeting and function of the ammonium transporter rhbg

• Auteur / Autrice : Fabien Sohet
• Direction : Caroline Le Van Kim
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Génomes et protéines
• Date : Soutenance en 2008
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Glycoprotéines

Transporteurs de cations

Phosphorylation

Ankyrines

Ammoniac

Résumé

La protéine rhbg, un membre humain de la superfamille amt/mep/rh des transporteurs d'ammonium, facilite le transport de nh3 et est ancrée à la membrane plasmique basolaterale de cellules épithéliales rénales, via l'ankyrine g, protéine adaptatrice du squelette membranaire dépendant de la spectrine. Nous avons montre que la triple substitution en alanine du motif fld qui lie le domaine c-terminal intracytoplasmique de rhbg a l'ankyrine g, détruit l'interaction de rhbg avec le squelette membranaire de lignées de cellules épithéliales recombinantes. Cette mutation retarde également l'adressage, diminue la stabilité à la surface et abolit la fonction de transport de nh3 de la protéine rhbg. Nous avons également montré qu'à la fois l'adressage a la membrane basolatérale, l'ancrage au squelette membranaire et l'activité de transport d'ammonium de la protéine sont régulés par l'état de phosphorylation de la tyrosine y429, qui appartient au signal d'adressage basolateral yed de rhbg localise dans son extrémité c-terminale intracytoplasmique. L'ensemble de ces résultats nous a conduits a proposer un modèle dans lequel l'adressage et la fonction de transport d'ammonium de rhbg sont régulés à la fois par la phosphorylation et la liaison au squelette membranaire de son domaine c-terminal cytoplasmique.

Rhbg, a human member of the amt/mep/rh/superfamily of ammonium transporters, has been shown to facilitate nh3 transport and to be anchored to the basolateral plasma membrane of kidney epithelial cells, via ankyrin g. We showed here that triple alanine substitution of the 419-fld-421 sequence, which links the cytoplasmic c-terminal domain of rhbg to ankyrin-g, not only disrupted the interaction of rhbg with the spectrin-based skeleton but also delayed its cell surface expression, decreased its plasma membrane stability and abolished its nh3 transport function in epithelial cell lines. We also demonstrated that basolateral targeting, anchoring to the membrane skeleton and ammonium transport activity are regulated by the phosphorylation status of tyrosine 429, which belongs to the yed basolateral targeting signal of rhbg localized in its c-terminal domain. All these results led to a model in which targeting and ammonium transport function of rhbg are regulated by both phosphorylation and membrane skeleton binding of the c-terminal cytoplasmic domain.