Etude des déterminants de la réplication du virus GB-B en culture cellulaire et in vivo : développement d'un modèle d'étude du virus de l'hépatite C

Analysis of GB virus B replication determinants in cell culture and in vivo : development of a surrogate model for studying C virus

• Auteur / Autrice : Lucile Warter
• Direction : Lisette Cohen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie et virologie
• Date : Soutenance en 2008
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Modèles animaux de maladie humaine

Génome viral

Interactions hôte-pathogène

Hepacivirus

Régulation de l'expression des gènes

génétique

Virus GB-B

Résumé

L'infection par le virus de l'hépatite C représente un problème majeur de santé publique. L'étude de l'infection par ce virus, ainsi que le développement de thérapies spécifiques au VHC sont néanmoins freinés par l'absence de petits modèles animaux sensibles à ce virus. Dans ce contexte, le virus GB-B (GBV-B), un virus hépatotrope et le plus proche parent du VHC, qui infecte des petits primates du nouveau monde (marmousets et tamarins), constitue un modèle de substitution intéressant pour étudier le VHC. Dans cette thématique, nous avons construit un système d'ARN sous-génomique du GBV-B, ou réplicon, capable de réplication en culture cellulaire. Grâce à ce système, nous avons mis en évidence le rôle déterminant des domaines I et II de la région 5' non codante (5'NC), ainsi que des protéines non structurales NS3, NS4A et NS5A du GBV-B, dans la réplication du génome viral en culture cellulaire. Le système de réplicon a également permis de montrer que 3 mutations identifiées comme étant essentielles à l'infectiosité chez le tamarin d'un génome chimérique du GBV-B contenant le domaine III de la région 5'NC du VHC, n'ont pas d'effet sur la traduction et la réplication de l'ARN chimérique en culture cellulaire. Par ailleurs, nous nous sommes attachés à construire des réplicons chimériques du GBV-B codant la polymérase NS5B du VHC, dans l'objectif de tester chez le petit primate infecté par un virus chimérique GBV-B/VHC correspondant des antiviraux ciblant spécifiquement NS5B du VHC. Enfin, nous avons exploré l'infectiosité chez le marmouset du clone moléculaire du GBV-B utilisé au laboratoire.

Hepatitis C virus (HCV) infection represents an important public health concern. The study of HCV infection, as well as the development of specific drugs to combat this infection, have been hampered by the lack of small animal models susceptible to HCV. In this context, GB virus B (GBV-B), an hepatotropic virus which infects small South America non-human primates (marmosets and tamarins) and which is closely related to HCV, constitutes an interesting surrogate model to study HCV. For these reasons, we have developed a dicistronic subgenomic GBV-B RNA (replicon) which autonomously replicates in cell culture. Using this replicon System, we showed that proximal domains I and II of the GBV-B 5' nontranslated region (5'NTR), as well as GBV-B nonstructural proteins NS3, NS4A and NS5A are critical determinants for RNA réplication in vitro. Using the GBV-B replicon, we also showed that mutations within the 3'NTR and NS5A encoding sequence identified as essential for the in vivo infectivity of a chimeric GBV-B genome comprising the domain III of the HCV 5'NTR, do not act in translation or replication of the chimeric replicon in cell culture, but rather at a later stage of the virus life cycle, possibly for viral particle assembly. Moreover, we have undertaken to create GBV-B/HCV chimeric replicons encoding HCV polymerase NS5B, in the aim to develop a System to assess the efficiency of antiviral drugs targeting HCV NS5B in small primates infected by a corresponding GBV-B/HCV chimeric virus. Finally, we have investigated the infectivity of the GBV-B molecular clone used in the laboratory in marmosets.