Etude fonctionnelle du rôle de l'interaction de la proteine HBx du virus de l'hépatite B avec les histones acétyltransférases dans la réplication virale et l'hépatocarcinogenèse

Functional study on the impact of the interaction between the hepatitis B virus X protein and histone acetyltransferase on viral replication and hepatocarcinogenesis

• Auteur / Autrice : Delphine Cougot
• Direction : Marie-Annick Buendia
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Bases fondamentales de l'oncogénèse
• Date : Soutenance en 2008
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Transactivateurs

Protéine CBP

Dermatite exfoliatrice

Histone acetyltransferases

Virus de l'hépatite B

Résumé

Le virus de l'hépatite B (VHB) est un facteur de risque majeur dans le développement du carcinome hépatocellulaire. Le trans activateur viral HBx participe à Phépatocarcinogenèse en perturbant de nombreuses fonctions cellulaires. Nous avons étudié l'activité transactivatrice de cette protéine dans le cadre de son interaction avec CREB, un facteur de transcription qui joue un rôle fondamental dans les fonctions hépatiques. Une étape clé dans l'activation de CREB est le recrutement de CBP/p300 sur la protéine CREB phosphorylée. Nous avons montré qu'HBx interagit et coopère avec CBP/p300 dans l'activation de CREB phosphorylée. Par immunoprécipitation de la chromatine, nous mettons en évidence qu'HBx augmente le recrutement de p300 sur les promoteurs dépendants de CREB, stimulant l'expression de gènes cibles qui seraient impliqués dans le développement du cancer du foie. Nous avons observé qu'HBx prolonge la phosphorylation de CREB et inhibe la déphosphorylation de CREB induite par HDAC1. En effet, HDAC1 module la phosphorylation de CREB en recrutant la phosphatase PP-1, Nous avons alors mis en évidence une interaction directe entre HBx et HDAC1. De plus, nous avons observé qu'HBx inhibe l'activité enzymatique de PP-1 in vitro et in vivo. L'ADNccc, la forme transcriptionnellement active du VHB est organisée sous la forme d'un minichromosome. Des travaux récents ont mis en évidence que les modifications épigénétiques régulent la transcription virale. HBx est indispensable à la réplication virale, nous avons émis l'hypothèse qu'elle pourrait moduler le recrutement des HAT et des HDAC sur l'ADNccc. Nos résultats préliminaires montrent qu'HBx et ses partenaires sont impliqués dans la régulation de la transcription virale et sont recrutés sur l'ADNccc.

The hepatitis B virus (HBV) is a major risk for the development of liver cancer. The transactivator HBx has been implicated in tumorigenesis. HBx activity is mediated protein-protein interactions. To better understand the molecular basis for HBx transcriptional activity, we analyzed the effects of HBx on the transcription factor CREB, which play pivotal role in the liver. Activation by CREB is known to occur upon phosphorylation and the subsequent recruitment of CBP/p300. We showed that HBx and CBP/p300 synergistically enhance CREB activity and that HBx interacts with CBP/p300. Using chromatin immunoprécipitation, we provide evidence that HBx increases p300 recruitment on CREB-responsive promoters of endogenous cellular gènes, which is associated with increased gene expression. In order to get insight into the regulation of CREB activity, we studied CREB phosphorylation. We showed that HBx prolongs its phosphorylation and that HBx is able to inhibit HDAC 1-mediated CREB déphosphorylation. Indeed, HDAC1 is involved in this mechanism through the recruitment of PP-1 phosphatase. We found that HBx directly binds HDAC1 and inhibits PP-1 activity. HBV replication is regulated at the level of transcription of the pregenomic RNA from covalently closed circular DNA. It has been reported that CBP/p300 are associated to thé cccDNA and that their activity on histone H3 and H4 acetylation is correlated with an increase in HBV replication. As HBx is essential for virus replication, we hypothesized that HBx may play a crucial role in the viral transcriptional activation through the recruitment of HAT on cccDNA. Our preliminary results revealed that HBx and its cellular partners are involved in the regulation of HBV transcription and are recruited on cccDNA.