Interêt de la mutagenèse dirigée et de la quantification des virus persistants dans le contexte de l'infection à VIH

Advantage of site directed mutagenesis and quantification of persistant virus in hiv disease

• Auteur / Autrice : Nathalie Désiré
• Direction : Jean-Claude Nicolas
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie et virologie
• Date : Soutenance en 2008
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Herpèsvirus humain de type 8

Charge virale

ADN viral

Provirus

Mutagenèse dirigée

Infections à VIH

Résumé

Dans le contexte de l'infection à VIH, l'apparition d'infections opportunistes et de certaines affections néoplasiques est notamment dues à la réactivation de virus persistants. Parmi ces infections virales persistantes on retrouve les infections dues aux virus l'HTLV-1 et l'HHV-8. La quantification du virus HHV-8 confirme que lors des pathologies évolutives associées à ce virus, la charge virale HHV-8 est plus élevée et semble être corrélée avec la gravité de la maladie. En ce qui concerne le virus HTLV-1, la médiane de charge provirale HTLV-1 retrouvée chez des sujets atteint de TSP/HAM est 6 fois plus élevée que chez les patients asymptomatiques. La charge provirale HTLV-1 sanguine n'était pas modifiée par la co-infection par le VIH. Enfin, la mesure de l'ADN-VIH-1, dans les PBMC de patients au stade de primo-infection VIH-1 mis sous traitement antirétro viral nous a permis d'observer une diminution de la charge provirale entre JO et M12. La deuxième partie de notre travail porte sur l'étude de la variabilité génétique du VIH-1 au cours des traitements antirétroviraux. Nous avons mis en évidence une insertion d'une lysine puis d'une arginine sur le gène de la TI au niveau de la région 100-105 qui n'avait jamais été décrite. L'insertion est responsable de la perte de fonctionnalité de l'enzyme due à une importante modification de la TI. Nous n'avons pas mis en évidence de bénéfice pour le virus à acquérir les mutations V75A et G190E. Puis nous avons étudié un groupe de patients traités par 3 analogues nucléosidiques et qui présentaient une réponse virologique partielle au traitement. Le profil de mutation majoritairement retrouvé était représenté M184V avec les 4 TAMs de profil 2 : D67N, K70R, T215F K219E.

Our aim was therefore to develop a method for quantifying proviral HIV-1 DNA, HTLV-1 DNA and HHV-8 DNA using real-time PCR that would be sensitive, reproducible and have a high throughput. The application of this technique to the rnonitoring of patients with primary HIV-1 infection has confirmed that HAART decreases the proviral load but has also shown that a detectable viral reservoir persists in the majority of patients. The hight viral loads of HHV-8 in MDC desease correlating with clinical symptoms and low viral load correlating with asymptomatic periods. The difference between HTLV-1 proviral load in TSP/HAM and asymptomatic moninfected patients was statiscally signifiant, but there were no difference between the HTLV-1 monoinfected and HTLV-l/HIV-1 coinfected groups. The hight viral loads of HHV-8 in MDC desease correlating with clinical symptoms and low viral load correlating with asymptomatic periods. HIV genetic variability is the result of the inability of HIV-1 RT to proofread nucleotide sequences during replication. We have identified a HIV virus presenting the G190E mutation along with a V75A mutation and with an insertion in the 100-105 of the RT encoding region. The addition of the insertion to G190E may increase the activity of the RT. Antiretroviral Therapy in HIV-1 infected patients may result in persistent moderate virological failure. In patients with persistently low levels of viremia under triple NRTIs including a thymidine analogue, most of the patients developed TAMs-2. The substitution at codon 219 in association with T215F is a glutamic acid (K219E) that could help viruses bearing TAM-2 in fîtness and resistance to drugs.