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Rôle de l’hélicase RuvAB lors du retournement de fourche de réplication chez la bactérie Escherichia coli
| Auteur / Autrice : | Zeynep Baharoglu |
| Direction : | Bénédicte Michel |
| Type : | Thèse de doctorat |
| Discipline(s) : | Génétique |
| Date : | Soutenance en 2008 |
| Etablissement(s) : | Paris 6 |
Mots clés
Mots clés libres
Résumé
Les fourches de réplication arrêtées peuvent être retournées lors de la réaction de retournement des fourches de réplication (RFR) chez la bactérie Escherichia coli. Cette réaction consiste en l’appariement des brins nouvellement synthétisés de la fourche pour former une structure à quatre branches, la Jonction de Holliday (JH). RuvAB est une hélicase induite par la présence de lésions de l’ADN. Elle se fixe spécifiquement sur les JH formées lors de la recombinaison homologue (RH) et permet leur résolution par la résolvase RuvC dans le complexe RuvABC. Nous avons montré que RuvAB retourne les fourches de réplication dans les mutants dnaEts, holD, et partiellement rep mais pas dans les mutants priA et dnaNts. Nous proposons donc que RuvAB possède deux fonctions distinctes : sa fonction dans la RH qui est bien décrite et un nouveau rôle dans la réplication. Une mutagénèse aléatoire dans ruvA nous a permis d’isoler et caractériser des mutants de dissociation de fonction, où le RFR est totalement ou partiellement aboli, tandis que divers tests de recombinaison (recombinaison Hfr, réparation par RH des lésions après irradiation UV ou traitement à la mitomycine C) montrent que la RH n’est pas affectée in vivo. Les mutants sont affectés pour la fixation à l'ADN, l’octamérisation et la stimulation de l'activité hélicase de RuvB in vitro. Les protéines RuvA affectées sont donc incapables de convertir des fourches de réplication en jonctions de Holliday tandis qu’elles restent capables de faire de la migration de branche et de résoudre les intermédiaires de recombinaison in vivo. Les données indiquent que les deux fonctions de RuvAB peuvent être séparées et que la réaction de RFR est plus exigeante que la RH.