Mécanisme de translocation de la toxine diphtérique
Auteur / Autrice : | Anne Chassaing |
Direction : | Daniel Gillet |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biochimie. Biophysique |
Date : | Soutenance en 2008 |
Etablissement(s) : | Paris, Muséum national d'histoire naturelle |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Sciences de la nature et de l'Homme - Évolution et écologie (Paris) |
Jury : | Président / Présidente : Max Goyffon |
Examinateurs / Examinatrices : Vincent Forge | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Bruno Beaumelle, Ina Attree-Delic |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
La toxine diphtérique (DT) une toxine bactérienne sécrétée par Corynebacterium diphtheriae. Lors de l’intoxication d’une cellule, le domaine de translocation (T) de la DT s’insère dans la membrane à pH acide et assiste la translocation du domaine catalytique (C) dans le cytosol. Le domaine T adopte une conformation en molten globule (MG) et devient compétent pour l’interaction membranaire. Nous avons identifié par mutagenèse les résidus du domaine T dont la protonation favorise la formation de l’état MG en solution et l’interaction membranaire. Les résultats montrent que la protonation concertée des six histidines du domaine T est impliquée dans la formation de l’état MG en solution. La paire His223-257 et l’His251 ont un effet prépondérant dans la formation de l’état molten globule en solution, alors que la paire His322-323 (mais également His251) est davantage impliquée dans l’interaction avec la membrane, et en particulier la liaison à la membrane. Nous avons étudié les changements de conformation des deux domaines C et T dans une protéine CT correspondant à la DT tronquée de son domaine R, afin de comprendre les effets du lien covalent sur les conformations respectives de C et T en fonction du pH. Les mutants CTW50/153F et CTW206/281F ont permis de suivre la fluorescence des Trp de chaque domaine dans la protéine CT. Les résultats montrent que le domaine T dirige la translocation de C dans les premières étapes de la translocation (formation de l’état MG, liaison et insertion membranaire), et qu’il pourrait jouer un rôle de chaperon en stabilisant l’état MG du domaine C.