Fluorescent biosensors for live cells analysis

• Auteur / Autrice : Olga Markova
• Direction : Piotr Bregestovski
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Neurosciences
• Date : Soutenance en 2008
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2 en cotutelle avec Bogomoletz Institute of Physiology
• Ecole(s) doctorale(s) : École Doctorale Sciences de la Vie et de la Santé (Marseille)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Électrophysiologie

Protéines

Biocapteurs

Fluorescence

Résumé

Les senseurs fluorescents deviennent un instrument puissant pour la mesure non-invasive de la concentration des ions intracellulaires et pour la localisation des protéines intracellulaires. Notre travail consiste à étudier les propriétés d'un senseurs C1- codés génétiquements, le 'C1-Sensor', qui est une construction CFP-YFP, et celles du 'Biosensor-GlyR', qui est un canal GlyR fusionné avec le C1-Sensor. Nous avons caractérisé les propriétés spectrales de ces senseurs, mesuré leurs sensibilité au C1- et évalué la [C1-]i dans des cellules CHO et des cultures hippocampales primaires. Dans la deuxième partie de notre travail, nous avons trouvé et décrit les caractéristiques temporelles et spatiales de la translocation de l'hippocalcin marqué par EYFP. Ce résultat laisse à penser que cette protéine permet de faire le décodage rapide des signaux calciques à des endroits spécifiques dans les neurones.

Flurorescent sensors become a powerful tool for non invasive monitoring of intracellular ion concentrations and intracellular protein localisation. In our work we study properties of genetically encoded C1 sensors 'C1-sensor'', that is a CFP-YFP based construct, ''Biosensor-GlyR'' that is a GlyR channel with C1-Sensor incorporated into intracellular domain, proposed method for application of this proteins to measurements of intracellular C1 in different cell types, identify sensitivity to C1 and estimate chloride concentration in cell lines and primary hippocampal cultures. In the second part of our work we reveal intracellular dynamics of hippocalcin, a member of neuronal calcium sensors protein family, tagged with yellow fluorescent protein. We identify spatial temporal characteristics of Ca2+ dependent hippocalcin translocations in process of hippocampal neurons that support the idea of hippocalcin role in a decoding of short place specific calcium signals in neurons.