Physical and functional cooperation between AP-1/beta-catenin and AP-1/NF(kappa)B : Role in tumorigenesis

• Auteur / Autrice : Kahina Toualbi
• Direction : Dominique Bernuau
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie et Pathologie des Epithéliums
• Date : Soutenance en 2007
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Cycline D1

bêta-Caténine

génétique

Facteur de transcription AP-1

Régulation de l'expression des gènes

Résumé

Le facteur AP-1, un complexe formé de protéines de la famille Fos et de la famille Jun, est un facteur de transcription qui joue un rôle important au cours de la carcinogenèse. La p-caténine stabilisée, souvent impliquée dans les cancers chez l'homme, peut s'accumuler dans le noyau, où, en conjonction avec des facteurs de transcription Tcf/Lef, elle active des gènes possédant les séquences régulatrices TBE. Une association directe entre ß-caténine et AP-1 n'a jamais été recherchée. Mes résultats ont permis de démontrer et de cartographier l'association physique entre p-caténine et AP-1 in vitro et in vivo. Puis j'ai montré une augmentation très importante de la transactivation des gènes impliqués dans la prolifération: cycline D1 et c-myc par surexpression de AP-1, cet effet étant médié par les sites TBE. Enfin, nous avons montré l'implication de la coopération p-caténine/AP-1 dans l'activation du promoteur de la cycline D1 par le sérum, in vitro par retard sur gel et in vivo par la technique d'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP). La poursuite de ces travaux a été la mise en évidence d'une autre coopération fonctionnelle pour la régulation de la cycline D1, entre la protéine JunD du complexe AP-1 et la protéine p65 de la famille NFicB, un facteur transcriptionnel à la croisée d'un grand nombre de processus cellulaires, telle la prolifération. J'ai montré l'implication de la coopération JunD/p65 dans l'activation du promoteur de la cycline D1 par le sérum, in vitro par retard sur gel et, in vivo par la ChIP. Un autre point important de cette étude est de montrer que la coopération synergique JunD/NFicB est dépendante de la voie P13Kinase/PDK-1.

AP-1, ß-catenin and NF&B are transcription factors involved in the regulation of cell prolifération which plays important roles in tumorigenesis. We investigated whether thèse factors cooperate for the transcriptional regulation of genes involved in prolifération (cyclin Dl (CD1) and c-myc) upon serum stimulation. We show that ß-catenin associates with c-Jun and c-Fos in vitro and in vivo. Promoter studies indicate that overexpression of AP-1 activates the transcription of CD1 and c-myc gènes, by a mechanism independent of the AP-1 site, and fully dependent on the TCF-binding site. We further demonstrate that AP-1/ß-catenin synergism is involved during serum-induced CD1 transcriptional activation. We identify a TCF-binding site on the CD1 promoter which binds in vivo a complex induced by serum, containing ß-catenin, TCF4, c-Fos, c-Jun, JunB and JunD. In the second study, we demonstrate a PBK/PDK1-dependent functional cooperation of NF/d3 and AP-1 in the transcriptional regulation of CD1 by serum. We show that overexpression of JunD/Fos proteins strongly activates the transcription mediated by the /d32 site of the CD1 promoter in reporter assays. Serum stimulation of immortalized human hepatocytes (IHH) induced the recruitment of p65, p50 and JunD to the /d32 site of the promoter in vivo. We further demonstrate that both the inhibition of PI3K and overexpression of a dominant negative form of PDK1 inhibited the AP-1 stimulating effect in reporter assays. The inhibition of PI3K also prevented serum induced recruitment of JunD, but not p65 or p50 to the promoter in vivo. JunD/p65 complexes, identified by coimmunoprecipitation, were decreased by siRNA inhibition of PDK1.