Traitement de l'épidermolyse bulleuse dystrophique canine par greffe de feuillets épidermiques génétiquement modifiés

Treatment of canine dystrophic epidermolysis bullosa by transplantation of genetically modified epidermal autografts

• Auteur / Autrice : Didier Pin
• Direction : Guerrino Meneguzzi
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie et pharmacologie cutanée
• Date : Soutenance en 2007
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Animaux

Chiens

Mutation

Thérapie génétique

Modèles animaux de maladie humaine

Épidermolyse bulleuse dystrophique

Résumé

Les epidermolyses bulleuses dystrophiques recessives (ebdr) sont des genodermatoses dues a des mutations du gene codant le collagene vii. Des travaux recents ont montre que les retrovirus transferent efficacement l'adnc codant le collagene vii dans les keratinocytes primaires ebdr qui produisent des epitheliums transplantables exprimant le transgene curatif a long terme chez la souris immunodeficiente (scid). Pour valider la therapie genique chez un hote immunocompetent, les cellules souches epidermiques de deux chiens presentant une forme spontanee d'ebdr due a une mutation du gene codant le collagene vii, ont ete transduites a l'aide du vecteur retroviral mscv-col7-vsvg exprimant le collagene vii canin. Des feuillets epidermiques, prepares in vitro a partir de ces cellules genetiquement corrigees, ont ete transplantes sur les chiens ebdr. Le suivi des greffes et l'analyse des greffons 1, 2 et 5 mois apres la greffe montrent -1) une prise de greffe a 8 jours -2) le developpement d'un epiderme adherent au derme sous jacent -3) l'absence de signe inflammatoire ou de signe de rejet et l'absence de reaction immunitaire a mediation cellulaire (lt cd4 et cd8) et a mediation humorale (ac anti-collagene 7) -4) la presence du transgene, 5 mois apres la greffe, dans les keratinocytes a l'origine des holoclones (cellules souches epidermiques) -5) la transcription du transgene et la traduction de l'arnm correspondant -6) la presence de collagene vii a la jonction dermo-epidermique et dans les keratinocytes supra-basaux. Ce premier essai clinique chez un hote immunocompetent demontre que la therapie genique ex vivo de l'ebdr permet une correction fonctionnelle durable de la maladie.

RECESSIVE DYSTROPHIC EPIDERMOLYSIS BULLOSA (RDEB) IS A GENODERMATOSIS CAUSED BY GENETIC MUTATIONS THAT HAMPER THE EXPRESSION OF COLLAGEN TYPE VII (COLVII). IT WAS SHOWN THAT RETROVIRAL VECTORS EFFICIENTLY TRANSFER THE COLVII CDMA INTO PRIMARY HUMAN RDEB KERATINOCYTES, REVERT THE RDEB PHENOTYPE RECOMBINANT COLVII AFTER GRAFTING ONTO SCID MICE. THE FEASIBILITY OF A GENE THERAPY APPROACH FOR RDEB WAS FURTHER VERIFIED IN A DOG MODEL OF SPONTANEOUS RDEB ASSOCIATED WITH AN AMINO ACID SUBSTITUTION IN THE COLLAGENIC DOMAIN OF COLVII. AUTOLOGOUS EPITHELIA MADE IN VITRO USING KERATINOCYTES TRANSFECTED WITH THE RETROVIRAL VECTOR MSCV-COL7-VSVG EXPRESSING THE WILD TYPE OF THE CANINE COLLVIIWERE GRAFTEl ONTO TWO RDEB DOGS. EIGHT DAYS AFTER IMPLANTATION, THE GRAFTED SITES CLINICALLY APPEARED TO BEAR A NORMAL SKIN. AT MONTH 1, NO CLINICAL SIGN OF INFLAMMATION OR IMMUNE REJECTtON OR EPIDERMAL DETACHMENT WAS OBSERVED. AT MONTH 2, EXAMINATION OF BIOPSIES OF THE GRAFTED AREAS SHOWED RESTORATION OF THE DERMAL-EPIDERMAL ADHESION, A STRONG IMMUNOREACTIVITY OF THE BASEMENT MEMBRANE TO ANTI-COLVII ANTIBODIES AND ABSENCE OF CELLULAR AND HUMORAL IMMUNE RESPONSE DESPITE A PERSISTENT EXPRESSION OF THE RECOMBINANT COLVII. AT MONTH 5, THE TRANSGÈNE PRESENTS IN EPIDERMAL STEM CELLS AND EXPRESS THE WILC TYPE COLLAGEN VII TRANSCRIPTS AND PROTEINS. THE PROTEINS ARE LOCATED AT THE DERMAL-EPIDERMAL JUNCTION AND IN THE CYTOPLASM OF ALL KERATINOCYTES. THESE RESULTS STRONGLY SUGGEST THAT RDEB CAN BE SUCCESSFULLY TREATED BY GENE TRANSFER WITHOUT ANY DETECTABLE ADVERSE EFFECT AND FOR A LONG TIME.