Impact des polymorphismes sur la régulation et l'interaction des récepteurs plaquettaires au collagène : l'intégrine alpha2 beta1 et la glycoprotéine VI

Impact of polymorphism on regulation and and interaction of platelets collagen receptor : integrin alpha2 beta1 and glycoprotein vi

• Auteur / Autrice : Yann Cheli
• Direction : William Vainchenker
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie des cellules sanguines
• Date : Soutenance en 2007
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Glycoprotéines de membrane plaquettaire

Régulation de l'expression des gènes

Intégrine alpha2bêta1

Plaquettes

Résumé

Au cours de ce travail de thèse, nous avons tout d'abord montré que les répétitions du dinucléotides ÇA régulent différemment l'expression de l'intégrine alpha2 betal chez la souris et l'homme. La présence de polymorphismes de ÇA dans le promoteur humain module la transcription par la fixation d'un complexe PARP-1, DNA-PKcs, Topollβ, Ku70/80 sur CA12 en coordination avec le facteur de transcription SP1, alors que les répétitions de ÇA situées dans l'intron de la souris régulent l'épissage par l'intermédiaire de hnRNP L Dans un second temps, nous avons montré qu'il existe une dichotomie in vivo dans l'hémostase primaire des souris invalidées pour la GPVI, causée par la présence d'un polymorphisme situé dans le chromosome 4 de la souris. La présence du génotype C57BL/6J a été associée au phénotype de saignement dit « long ». Cette différence ne serait pas due à une différence de fonctionnalité des plaquettes mais plutôt de la composition d< la matrice de la paroi vasculaire. Enfin, nous avons démontré que la présence de la N-glycosylation de la GPVI est nécessaire pour la reconnaissance du collagène, du CRP, et de la CVX. Par contre, les polymorphismes naturels retrouvés dans le domaine extracellulaire de la GPVI n'ont aucun effet sur la reconnaissance de ces ligands. Cependant, deux mutations retrouvées dans le domaine intracellulaire influencent la fixation de FYN/LYN et de la calmoduline et donc modifient la signalisation et le clivage de la GPVI par des métallo-protéases

In this work, we show that dinuclueotide repeat ÇA regulate differently the expression of human and mouse ITGA2. We demonstrate that polymorphism in 5' regulatory region of ITGA2 enhance transcription by fixation of a complex PARP-1, DNA-PKcs, Topollβ, Ku70/80 on CA12 sequence in conjunction with SP1 binding, whereas polymorphism in mouse intronic ÇA repeats modify hnRNP L binding and splicing efficiency. We also noticed a dichotomy on bleeding time for mouse GPVI knock out that we related to a polymorphism situated in mouse chromosome 4. Indeed, the C57BL/6J background at this locus was correlated to a high bleeding phenotype in opposite of a 129 background that was associated with a low bleeding phenotype. Moreover, this difference seems not to be inherited from platelet activation or coagulation but from a difference in the composition of the vascular matrix. Finally, we show that N glycosilation was necessary for recognition of collagen, CRP or convulxin. However, naturals polymorphism situated in extracellular domain have no affect on the binding but intracellular substitution influence the binding of FYN/LYN and calmodulin. As a consequence, signal transduction and GPVI shredding by a metalloproteinase may be affected by these differences in binding.