Thèse soutenue

Caractérisation de complexes protéiques : étude statique et dynamique d'associations entre protéines membranaires

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Auteur / Autrice : Myriam Reffay
Direction : Wladimir Urbach
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Constituants élémentaires et systèmes complexes
Date : Soutenance en 2007
Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

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Les protéines membranaires interviennent dans de nombreux mécanismes cellulaires. Cependant, peu de techniques sont adaptées à l’étude des interactions entre protéines membranaires. Nous sommes parvenus à les caractériser dans un milieu de membranes modèles (une phase L3) dont l’épaisseur et la séparation entre bicouches sont ajustables. L’étude de la diffusion d’objets membranaires a permis de remettre en question l’utilisation du modèle de Saffman-Delbrück. Ces résultats montrent la sensibilité de la mobilité par rapport à l’état de liaison d���une protéine. Grâce à des mesures de recouvrement de fluorescence, nous avons caractérisé des interactions entre protéines membranaires en étudiant deux exemples : l’interaction connue entre streptavidine et biotine et celle entre protéines constituant une pompe à efflux chez la bactérie P. Aeruginosa. Cette thèse s’articule autour des différentes questions soulevées par une interaction : la géométrie du complexe, sa stoechiométrie selon différentes conditions de pH mais aussi la mesure des constantes dynamiques de l’accrochage comme les taux d’association ou de dissociation ainsi que des constantes d’affinité. Dans un dernier volet, nous nous sommes intéressés aux forces d’interaction et aux énergies mises en jeu en utilisant la spectroscopie dynamique de force avec la technique du Biomembrane Force Probe