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des thèses françaises
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Sélection in vitro des ribozymes ''hairpin'' adénine-dépendants pour cibler l'ARN transcrit du gène Tpl-2
| Auteur / Autrice : | Yan-Li Li |
| Direction : | Marie-Christine Maurel |
| Type : | Thèse de doctorat |
| Discipline(s) : | Biologie moléculaire, Biochime et Evolution moléculaire |
| Date : | Soutenance en 2007 |
| Etablissement(s) : | Paris 6 |
Mots clés
Résumé
Le ribozyme ‘‘hairpin ‘‘ est un petit ARN auto-coupant, qui réalise la coupure endonucléolytique d‘une séquence cible en cis et en trans. Mon travail a consisté '88 développer un nouveau type de ribozyme ‘‘hairpin ‘ adénine-dépendant pour des applications thérapeutiques. Dans ce but, j ‘ai réalisé une sélection in vitro partir d ‘un ribozyme ‘‘hairpin ‘ modifié, dont la séquence cible a été remplacée par une séquence transcrite du gène Tpl-2. La surexpression du gène Tpl-2 est impliquée dans la multiplication cellulaire dans 40% des cancers du sein. A partir d ‘une population d ‘ARN aléatoire contenant 20 x 10 super 14 nosupersub molécules, des ribozymes appropriés ont été sélectionnés, clonés et séquencés. Parmi les trente clones séquencés, le ribozyme le plus efficace provenant du clone 28 (Tpl-2 ribozyme 28) a été ensuite caractérisé et analysé en variant le pH, la concentration du Mg super 2+ nosupersub , de l ‘adénine et de différents cofacteurs. Ces résultats montrent que Tpl-2ribozyme 28 peut couper tr ès efficacement sa séquence cible de 25 nucléotides (nt), en cis et également en trans. De plus, il peut couper une plus longue séquence cible de 54 nt en trans, en réalisant de multiples « turnover ».