Modification chimique par introduction sélective de charge Tag pour la quantification des protéines par désorption MALDI en spectrométrie de masse à temps de vol

Chemical modification by charge Tag introduction for proteins quantification by desorption MALDI in time of flight mass spectrometry

• Auteur / Autrice : Diane Lebeau
• Direction : Jean-Claude Tabet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Systèmes bio-organiques. Spectrochimie
• Date : Soutenance en 2007
• Etablissement(s) : Paris 6

Mots clés

Mots clés libres

Charge Tag

Quantification des protéines

Psd

Condition non-dénaturante

Protéomique

Résumé

Une nouvelle méthode de quantification de protéines cibles par spectrométrie de masse MALDI/TOF a été mise au point. Le but est de quantifier une protéine isolée sur une puce à protéines. Cinq dérivés d’esters de N-hydroxysucinimides appelés Charge Tag ont été synthétisés. Des expériences PSD-MALDI-TOF/TOF montrent que ceux-ci modifient la fonction N-terminale des protéines et la fonction amine primaire de la chaîne latérale des résidus lysines. Lors de leur dissociation le site préchargé préserve sa charge, donnant la série y ou b selon que le Charge Tag est localisé du côté N ou C-terminal. Dans un deuxième temps, l’impact de la modification chimique sur la structure tridimensionnelle de la protéine a été étudié. Celle-ci ne modifie que les sites les plus accessibles, sans accéder au cœur de la protéine. Ainsi la reconnaissance des protéines modifiées par leur anticorps sur la puce à protéines est possible. Enfin, la quantification relative et absolue de protéines entières isolées ou incluses dans un protéome complexe, le sérum humain a été montrée.