L’étude de l'interaction entre l'Hypéricine avec les LDL : l'effet des récepteurs LDL sur l'accumulation du complexe Hypericine/LDL dans les cellules U-87 MG

The study of the interaction between hypericin and low-density lipoproteins (LDL) : the effect of the LDL receptors on the accumulation of the complex hypericin/LDL in glioma cells U-87 MG

• Auteur / Autrice : Slávka Kaščáková
• Direction : Jean-Claude Maurizot, Pavol Miskovsky
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biophysique
• Date : Soutenance en 2007
• Etablissement(s) : Orléans en cotutelle avec Université Pavol-Jozef-Šafárik (Cassovie, Slovaquie ; 1959-....)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Récepteurs aux lipoprotéines LDL

Lipoprotéines de basse densité

Photosensibilisants

Oxydation

Hypéricine

Mots clés libres

Accumulation dans la cellule

Résumé

L'internalisation et la distribution subcellulaire des photosensibilisateurs (pts) sont des paramétres critiques dans l'efficacité des thérapies photodynamiques. Les LDL font parti des transporteurs naturels les plus importants des pts hydrophobiques. L 'Hypéricine (Hyp) est un pigment photosensible et naturelle. En raison de son caractère, l 'Hyp peut interagir avec les LDL et être spécifiquement vectorisée vers les cellules. Nous montrons par spectroscopie d'absorbance et de fluorescence que l'Hyp interagit avec les LDL sous forme monomérique pour des ratios de concentration Hyp/LDL inférieurs à 30: 1. Des ratios supérieurs conduisent à la formation d'agrégats d'Hyp dans les LDL ce qui se traduit par les quenching statique et/ou dynamique de la fluorescence de l'Hyp. Nous montrons que la photoactivation de l'Hyp induit l'oxydation des LDL. Le niveau d'oxydation maximal étant atteint pour un ratio Hyp/LDL = 30 :1. L'implication des récepteurs aux LDL dans l'internalisation de l'Hyp par des cellules U-87 MG a être évaluée. Nos résultats indiquent que la concentration d'Hyp dans les cellules est influencé par la composition du milieu de culture. D'autre part, la concentration d'Hyp dans les cellules cultivée avec des LDL est proportionnelle au ratio Hyp/LDL. De plus, une augmentation importante de l'internalisation de l'Hyp a été correlée avec la surexpression des récepteurs aux LDL. Enfin, nous montrons que l'Hyp internalisée se concentre dans les lysosomes et sa quantité augmente avec le nombre de récepteurs aux LDL lorsque le milieu de culture contient des LDL. Ces résultats suggère que la voie d'internalisation des LDL est essentielle à l' accumulation d'Hyp dans les cellules.

The incorporation and subcellular localization of photosensitizers (pts) are critical determinants of their efficiency in photodynamic therapy. The most important transporters of hydrophobie pts are low-density lipoproteins (LOL). Hypericin (Hyp) is a natural photosensitizing pigment. According to character of Hyp and possibility of its specific targeting into cells through LDL, the study of •. Interaction of Hyp with LDL is important. By means of absorption and fluorescence spectroscopy we showed, that Hyp binds to LOL as monomers up to concentration ratio Hyp/LDL = 30:1. Further increasing ofHyp concentration leads to the formation of Hyp aggregates inside LDL and/or dynamic self-quenching of Hyp. We demonstrated that photoactivated Hyp oxidizes LDL. The maximum of the oxidation of LDL by Hyp is achieved for ratio Hyp/LDL = 30: 1. For higher ratio a decrease in the oxidation of LDL was observed. Further the dependence of the uptake of Hyp by U-87 MG cells on the level of expression of LDL receptors was studied. The results show that the composition of incubation medium influences the concentration of Hyp in cells. The intracellular concentration of Hyp in the presence of LDL is proportional to the Hyp/LDL ratio. A role of LDL receptor pathway for Hyp delivery to cells was confinned by the increase of Hyp uptake in the presence ofLDL for the higher number of LDL receptors. The co-localization experiments showed the lysosomal localization of Hyp with enhanced Hyp concentration for cells with elevated number of LDL receptors when LDL was used as transporters. Our results suggest that LDL and its pathway play an important role in the Hyp delivery and accumulation into the cells.