La protéine ARFP du virus de l'hépatite C : Mécanismes de traduction, régulation de synthèse et construction d'outils pour l'étude du rôle de la protéine dans l'infection virale

Hepatitis C virus ARFP protein : Translation mechanisms, synthesis regulation and tool construction for the study of the protein role during viral infection

• Auteur / Autrice : Marie Wolf
• Direction : Catherine Schuster
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et moléculaire
• Date : Soutenance en 2006
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Infections à flaviviridés

Virus de l'hépatite C

Résumé

Le génome du Virus de l’Hépatite C (VHC) est un ARN simple brin de polarité positive portant un cadre ouvert de lecture (ORF) codant une polyprotéine, et un ORF chevauchant dans la phase +1 codant une protéine appelée ARFP. Deux modes de traduction ont été proposés pour expliquer la synthèse d’ARFP : un glissement de cadre de lecture de type et deux événements d’initiation interne produisant respectivement les formes fARFP, ii26ARFP et ii86/88ARFP. Nous avons étudié la traduction d’ARFP et montré que dans la cellule seules ii26ARFP et ii86/88ARFP sont synthétisées, cette dernière étant majoritaire, et que cette traduction est régulée par la protéine de capside. Nous avons étudié la fonction d’ARFP et identifié 6 candidats interactants par criblage par double-hybride dans la levure. Le rôle de ces interactions lors de l’infection virale sera testé. Finalement, nous avons délété ARFP d’un clone infectieux VHC ce qui permettra d’étudier l’impact de la protéine dans le cycle viral complet.

Hepatitis C Virus (HCV) genome is a single stranded positive RNA carrying an open reading frame (ORF) encoding a polyprotein, and an overlapping ORF in the +1 frame encoding a protein called ARFP. Two translation mechanisms have been proposed to explain ARFP synthesis: a frameshifting event and two internal initiation events producing respectively fARFP, ii26ARFP and ii86/88ARFP. We studied ARFP translation and showed that in the cell only ii26ARFP et ii86/88ARFP are synthesized, that the latest is the major form, and that translation is regulated by the capsid protein. We further studied ARFP function and identified 6 potential cellular partners by yeast two-hybrid screen. The relevance of these interactions during natural infection will be tested. Finally, we deleted ARFP from an infectious HCV clone which will allow to explore the protein impact in the complete HCV viral cycle.