Thèse soutenue

Rôle et régulation des isoformes de la MAPKinase Kinase Kinase B-Raf

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Auteur / Autrice : Isabelle Hmitou
Direction : Alain Eychène
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques. Biologie cellulaire et moléculaire du développement
Date : Soutenance en 2006
Etablissement(s) : Paris 11
Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université de Paris-Sud. Faculté des sciences d'Orsay (Essonne)

Résumé

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La sérine/thréonine kinase B-Raf est impliquée dans de nombreux processus cellulaires chez les Métazoaires. Le gène B-raf code plusieurs isoformes résultant d'épissage alternatif. La présence des séquences codées par les exons alternatifs 8b et 9b, situées entre le domaine régulateur et le domaine kinase de B-Raf, module les propriétés biochimiques et oncogéniques de B-Raf : l'exon 9b augmente l'activité kinase et l'interaction avec MEK, l'exon 8b les diminue. Mon travail de thèse a eu pour objectif à la fois de comprendre les bases moléculaires du mécanisme de régulation différentielle des isoformes de B-Raf et également d'analyser leur importance fonctionnelle. J'ai ainsi montré que la présence des séquences codées par les exons 8b et 9b interférent avec l'autoinhibition du domaine régulateur sur le domaine kinase. Ces séquences interfèrent également avec la phosphorylation des résidus S365 et S429 situés dans la même région charnière, indépendamment des interactions intramoléculaires. Ainsi, alors que le niveau de phosphorylation de la S365 est modulé par la présence des exons, la phosphorylation de la S429 n'est pas modulée par les séquences alternatives mais aurait des conséquences différentes en fonction de l'isoforme. D'autre part, afin de comprendre le rôle physiologique des isoformes de B-Raf contenant les séquences codées par les exons 8b et 9b, nous avons généré des lignées de souris pour lesquelles la délétion conditionnelle de ces exons est rendue possible grâce à l'approche Cre/Lox. L'obtention de souris invalidées pour les exons 8b et 9b permettra de mieux comprendre le rôle spécifique des isoformes de B-Raf, en particulier au cours du développement.