Identification et exocytose d'organelles dans les astrocytes en culture : couplage de la microscopie à onde évanescente et de la décomposition spectrale
Auteur / Autrice : | Fabien Nadrigny |
Direction : | Serge Charpak |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Neurosciences |
Date : | Soutenance en 2006 |
Etablissement(s) : | Paris 6 |
Résumé
Nous avons adapté le unmixing pour étudier dans des cellules en culture la colocalisation, au niveau uni-vésiculaire, de colorants de spectres mal séparés en présence d'autofluorescence. Nous avons introduit l'intervalle de confiance de l'estimation des quantités de colorants. Appliquée au marquage des organelles astrocytaires avec la EGFP et l'acridine orange, cette méthode a montré que l'apparente colocalisation entre ces marqueurs reflète en fait la présence d'acridine orange plus intense que la EGFP et co-existant dans les mêmes organelles sous deux formes verte et rouge. A l'aide du unmixing et de la microscopie à onde évanescente, nous avons ensuite montré que les organelles autofluorescents dans les astrocytes sont en majorité des lysosomes capables de fusionner lors d'une stimulation qui engendre l'augmentation du calcium intra-cellulaire. Ces lysosomes sont peut-être les organelles majoritairement responsables de l'exocytose dans les astrocytes en culture.