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Thèse soutenue

Electrophorèse en solutions quasi-isoélectriques d'ampholytes

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Auteur / Autrice : Jean-Marc Busnel
Direction : Gabriel Peltre
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Chimie analytique
Date : Soutenance en 2006
Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

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L’électrophorèse capillaire de zone (ECZ) s’est imposée grâce à sa rapidité et ses capacités séparatives. Cependant, bien que très performante, elle présente des limitations, notamment, la chaleur dégagée par effet Joule lorsque des champs électriques élevés sont utilisés. Afin de pouvoir disposer de méthodes d’analyse rapides, les électrolytes supports de faibles conductivités constituent une alternative de choix par rapport aux électrolytes classiques. Notre étude porte sur l'emploi d’ampholytes, habituellement utilisés en focalisation isoélectrique (IEF), comme électrolytes supports de faible conductivité en ECZ. Nous avons, à partir d’un mélange d’ampholytes de gamme large de pH, préparé des fractions d’ampholytes d’intervalle étroit de pH; des solutions quasi-isoélectriques d’ampholytes. Après les avoir caractérisées d’un point de vue physico-chimique (pH, conductivité, capacité tampon, fonction de régulation de Kohlrausch), nous avons montré qu’elles peuvent être utilisées avantageusement par rapport aux électrolytes supports classiques pour la réalisation, sous haut champ électrique, de séparations rapides et de grande efficacité. De plus, en analysant des digestats trypsiques de protéines, nous avons aussi montré que ces séparations sont compatibles avec une détection par spectrométrie de masse. Par ailleurs, des méthodes de préconcentration en ligne, telles que la préconcentration par amplification de champ électrique ou l’isotachophorèse peuvent être intégrées, individuellement mais aussi simultanément, en amont d’une séparation par ECZ dans des solutions quasi-isoélectriques d’ampholytes, dans le but d’améliorer considérablement la sensibilité de détection. En dernier lieu, nous avons aussi étudié l’impact sur la résolution, de la présence de tensioactifs neutres ou zwitterioniques dans les solutions quasi-isoélectriques d’ampholytes, pour la séparation de protéines.