Etude des souches du virus de l’hépatite B dans les compartiments sérique et leucocytaire chez des patients présentant une infection B occulte et chez des témoins

Study of hepatitis B virus strains in serum and in peripheral blood mononuclear cells in patients with occult hepatitis B virus infection and in control groups

• Auteur / Autrice : Anne-Aurélie Mazet
• Direction : Sophie Alain
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie - Sciences - Santé. Médecine
• Date : Soutenance en 2006
• Etablissement(s) : Limoges
• Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université de Limoges. Faculté de médecine et de pharmacie

Mots clés

Mots clés contrôlés

Leucocytes

ADN

Réaction de polymérisation en chaîne

Virus de l'hépatite B

Résumé

Les facteurs à l’origine des infections occultes par le virus de l’hépatite B (VHB) étant encore mal connus, nos travaux ont eu pour objectif d’améliorer la compréhension des mécanismes à l’origine de la persistance virale chez les patients AgHBs-. Nous avons analysé la séquence du gène S dans des populations de patients porteurs d’anticorps anti-HBc isolés, et plus particulièrement d’un patient multiinfecté ayant réactivé son hépatite B, et montré que les mutations dans la région antigénique majeure de la protéine de surface ne peuvent être seules responsables du profil d’AgHBs-. Les leucocytes périphériques (PBMC) pourraient jouer un rôle de réservoir de multiplication du VHB, permettant au virus d’échapper à la réponse immune. Nous avons mis au point une technique sensible et très spécifique de quantification des intermédiaires de réplication cccDNA du virus dans les PBMC et adapté une méthode publiée de détection de l’ADN intégré. Nous avons détecté l’ADN du VHB dans les PBMC d’une forte proportion de patients AgHBs-. Cet ADN est essentiellement sous forme relâchée, la présence du cccDNA ou de l’ADN intégré paraît anecdotique ou très minoritaire. L’étude de patients porteurs chroniques de l’AgHBs suggère également le rôle de réservoir passif des PBMC. La détection d’ADN intégré dans le foie ou dans les PBMC de deux patients AgHBs+ a montré le caractère fragmenté du génome intégré. Cette fragmentation pourrait expliquer le défaut d’expression de l’AgHBs chez les patients AgHBs-. Nous ne pouvons pas exclure que l’absence de détection de l’ADN intégré dans les PBMC des patients AgHBs- soit lié à un manque de sensibilité de la technique. La poursuite de ces travaux devrait permettre de mieux comprendre les mécanismes des infections occultes.

As the origins of occult hepatitis B are still unknown, the aim of our study was to establish how hepatitis B virus (HBV) infection persists. Analysis of S gene sequence in isolated anti-HBc-positive carriers, particularly in a multiple infected patient, revealed that the lack of HBsAg in these patients could not be explained solely by mutations in the major hydrophilic loop of HBsAg. In a second time, we attempt to determine whether HBV replicates in peripheral blood mononuclear cells (PBMC), which may allow the virus to escape the immune response. We optimized a sensitive and specific method to quantify HBV cccDNA in various samples and adapted a published method for the detection of HBV integrated sequences. HBV DNA, detected in a high proportion of PBMC from HBsAg- patients, was mainly in relaxed form. Replicative (cccDNA) or integrated forms were found only infrequently and in extremely low levels in PBMC. Study of HBsAg+ patients suggests also that PBMC may serve as a passive reservoir. HBV DNA integration in host cellular DNA may cause rearrangement of the viral sequence and may alter the HBsAg expression. It remains uncertain whether the absence of integrated DNA is due to a lack of sensibility or to the absence of integrated sequences. Further investigations are ongoing to clarify the pathobiological basis of occult hepatitis B.