Recherche Avancée

Thèse soutenue

Instrumentation biophotonique pour la mesure d'interactions moléculaires dans la cellule

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Auteur / Autrice : Corentin Spriet
Direction : Bernard Vandenbunder
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Instrumentation et analyse avancée
Date : Soutenance en 2006
Etablissement(s) : Lille 1

Résumé

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La cellule est un ensemble tridimensionnel complexe et dynamique. L'ensemble de ses fonctions est régulé par la formation de complexes multi-protéiques. L'étude de la formation de ces complexes dans la cellule est donc une question rencontrée de façon ubiquitaire en biologie. Différentes techniques permettent d'observer ces interactions moléculaires. Nous avons choisi d'utiliser l'étude FRET par mesure de FLIM, cette technique étant le meilleur compromis entre invasivité et précision des résultats. En particulier, notre approche repose sur le comptage de photon unique corrélé dans le temps (TCSPC), cette technique étant la plus sensible et la plus précise. Ce manuscrit présente les différentes optimisations que nous avons apportées aux systèmes de mesure de temps de vie classiquement utilisés en microscopie. Pour cela, nous avons tout d'abord optimisé l'instrumentation liée à cette technologie en implémentant de nouvelles solutions d'excitation et de mesures. Après une caractérisation de ces éléments, nous avons testé différentes améliorations de l'analyse des données, en particulier pour tenir compte de l'hétérogénéité des interactions lors d'expériences d'imagerie de temps vie de fluorescence réalisées sur cellule. Malgré ce système d'acquisition, différentes questions restent complexes à résoudre en utilisant les mesures de FLIM seules. Nous avons donc développé et caractérisé un système de mesures corrélées de spectre et de temps de vie de fluorescence (SLiM). L'exploitation de ces données dans les études de FRET sera également discutée. Chacun de ces systèmes de mesure de FRET a été appliqué a différentes problématiques biologiques que nous détaillerons.