Préparation de peptides antimicrobiens à partir de l'hydrolyse enzymatique de deux protéines : l'hémoglobine bovine et l'α-lactalbumine bovine

Antimicrobial peptides preparation from the enzymatic hydrolysis of two proteins : bovine hemoglobine and bovine α-lactalbumin

• Auteur / Autrice : Véronique Dubois
• Direction : Naïma Nedjar
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Stratégie d'exploitation des fonctions biologiques. Biochimie
• Date : Soutenance en 2006
• Etablissement(s) : Lille 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Extraction par solvant

Hydrolysats de protéines

Spectroscopie de masse

Chromatographie en phase liquide à hautes performances

Concentration minimale inhibitrice

Antibiotiques peptidiques

Sérine-protéases

Lactalbumines

Pepsines

Hémoglobine

Résumé

Vingt quatre peptides antimicrobiens ont été isolés par CLHP à partir d'un hydrolysat pepsique d'hémoglobine bovine à 3% de degré d'hydrolyse. Cinq peptides antimicrobiens : α 107141, α 107-136, α 133-141, α 137-141 et β 126-145 ont été purifiés en une seule étape de CLHP. Leurs CMI, effet hémolytique ainsi que quelques propriétés structurales ont pu être déterminés. L'amélioration des méthodes de préparation de ces peptides antimicrobiens a montré que: l'augmentation de la température d'incubation permettait d'augmenter les concentrations des peptides antimicrobiens, et que le pH d'incubation avait un effet sur la sélectivité de l'enzyme en favorisant les coupures en Cterminal de la Leucine lors de l'hydrolyse en conditions dénaturantes. En conditions natives, le pH 3,5 a permis l'obtention de peptides antimicrobiens absents lors de l'hydrolyse menée à pH 4,5. La mise en place d'un système biphasique eau/butan-2-ol a permis d'extraire sélectivement plusieurs peptides antimicrobiens. Un nouveau modèle d'étude a été mis en place à partir de l'α-Lactalbumine. Après avoir étudié différents paramètres d'hydrolyse, le choix s'est porté sur l'hydrolyse chymotrypsique de l'apoforme de l'α-Lactalbumine dans le tampon phosphate de sodium 100 mM pH 7,4 pour rechercher des peptides antimicrobiens. La population peptidique au cours de cette cinétique d'hydrolyse. A été établie par différentes techniques de spectrométrie de masse. Une activité antimicrobienne a été mise en évidence au sein de plusieurs hydrolysats chymotrypsique de l'α-Lactalbumine. Deux hydrolysats se sont montrés particulièrement actifs: l'hydrolysat de 30 minutes et celui de 12H.