Caractérisation des cellules mésenchymateuses non manipulées : application au contrôle de qualité des greffons médullaires

• Auteur / Autrice : Nathalie Boiret-Dupré
• Direction : Marc Gabriel Berger
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie et de la santé. Hématologie biologique
• Date : Soutenance en 2006
• Etablissement(s) : Clermont-Ferrand 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Qualité -- Contrôle

Thérapeutique cellulaire

Résumé

Les cellules mésenchymateuses (CM) ouvrent de séduisantes perspectives pour de nouvelles applications en thérapie cellulaire. Leur rareté dans la moelle osseuse implique une sélection par adhérence et une expansion in vitro systématique. Celle-ci s'accompagne d'une homogénéisation de leurs caractéristiques biologiques laissant supposer que les CM amplifiées ne sont peut-être pas identiques aux CM natives. Notre travail montre l'enrichissement des hématons en progéniteurs hématopoïétiques et mésenchymateux. Tous les CFU-F sont inclus dans la population des cellules adhérentes CD45-CD14-/GlyA-, ce qui conforte la négativité de l'antigène CD45 sur les CM. En fait, les 2 sous populations : CD45-CD14-/CD73+ et CD45-CD14-/CD49a+, isolées de moelle fraîche, contiennent l'une et l'autre l'ensemble des progéniteurs mésenchymateux. Quelques différences apparaissent entre CM natives et expandues suggérant une modification in vitro de l'expression de certains antigènes. L'ensemble de ces résultats nous conduit à proposer un phénotypage CD45-CD14-/CD73+ et un test fonctionnel CFU-F pour le Contrôle de Qualité des cellules mésenchymateuses utilisées en thérapie cellulaire, notamment en orthopédie et dans les allogreffes. La fréquence des progéniteurs mésenchymateux est plus élevée dans les hématons retenus dans les filtres de greffons médullaires et le tissu spongieux de tête férorale que dans les greffons filtrés, mais leurs capacités de prolifération sont superposables. La récupération des hématons pour une utilisation thérapeutique paraît donc intéressante. L'étude de la cinétique de prolifération des CFU-F natifs suggère une altération rapide des capacités de prolifération dès la culture primaire, ce qui nécessite la définition de nouvelles conditions de culture capables de préserver les propriétés des progéniteurs natifs.

Mesenchymal cells (MC) open attractive new possibilities for applications in cell therapy. Their rarity in adult bone marrow 5BM) necessitates their selection by adherence and their in vitro amplification before use. The apparent homogenization of their characteristics during this amplification suggests that expanded MC may not be identical to native MC. Our work shows that hematons are enriched in hematopoietic and mesenchymal progenitors. All the mesenchymal progenitors are included in the CD45-CD14-/GlyA- adherent subset that is in favour of the negavity of the CD45 on MC. In fact, 2 sub-populations -CD45-CD14-/CD73+ and CD45-CD14-/CD49a+- isolated from fresh BM, contain all the CFU-F. Slight differences between expanded and native MC suggest an in vitro modulation of the expression of somme antigens. These findings lead us to propose a phenotypic test (CD45-CD14-/CD73+ numeration) and a clonogenic test (CFU-F assay) for the Quality Control of MC used in cell therapy, especially for orthopaedic application and BM allograft. MC are more numerous in hematons, usually eliminated through BM filtration, and in the spongy bone of the femoral head, than they are in filtered BM grafts, but their proliferative capacity is identical. The removal of these tissue aggregates seems to be interesting for therapeutic use. The proliferative kinetics of native CFU-F suggest that the proliferative property deteriorates rapidly during the primary culture, so new culture conditions are needed to preserve the native properties of progenitor cells.