Inactivation de l'α(1. 3)-fucosyltransférase et de la β(1. 2)-xylotransférase, en vue de la production de protéines recombinantes d'intérêt thérapeutique chez la luzerne

Inactivation of α(1. 3)-fucosyltransferase and β(1. 2)-xylotransferase in order to produce therapeutic recombinant proteins in alfafa

• Auteur / Autrice : Christophe Sourrouille
• Direction : Véronique Gomord
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et moléculaire
• Date : Soutenance en 2005
• Etablissement(s) : Rouen

Mots clés

Mots clés contrôlés

Glycosylation

Réponse immunitaire

Protéines recombinées

Luzerne

Fucosyltransférases

Mots clés libres

Xylose

Rna-interférence

Résumé

Ces travaux développent la stratégie de PTGS dans l'optique d'inhiber les activités de l'α(1. 3)-fucosyltransférase et de la β(1. 2)-xylotransférase chez Medicago sativa. Dans cette perspective, nous avons cloné et caractérisé les ADNc codant ces deux glycosyltransférases. Pour induire chez M. Sativa le PTGS, nous avons transformé des plantes avec des constructions sens, antisens et intron-hairpin ARN (ihpARN) ciblant soit les α(1. 3)-FucT, soit la β(1. 2)-XylT. Nous avons sélectionné un transformant qui présente une forte diminution du niveau de l'α(1. 3)-fucosylation de ses glycoprotéines et deux plantes présentant une diminution de la β(1. 2)-xylosylation. Chez ces plantes, nous avons montré une forte diminution des transcrits correspondant aux glycotransférases ciblées. Enfin, nous avons démontré que les constructions '' inhibitrices '' réalisées à partir de l'ADNc de la β(1. 2)-XylT de M. Sativa, sont capables d'induire le PTGS dans un système hétérologue : les cellules de tabac BY-2.

This work develops the strategy of PTGS with the aim of inhibiting α(1. 3)-fucosyltransferase (FucT) and β(1. 2)-xylotransferase (XylT) activities in Medicago sativa. From this perspective, the cDNAs coding for these two glycoltransferases have been cloned and characterized. To induce the PTGS in M. Sativa, we have transformed plants with sens, antisens and intron-hairpin ARN (ihpARN) constructs targeting either α(1. 3)-FucT or β(1. 2)-XylT. Then, we have selected one transformant presenting a decrease in α(1. 3)-fucosylation of its glycoproteins and two plants presenting a reduction in the β(1. 2)-xylosylation. In addition, in these plants, we have shown a strong diminution in the amount of α(1. 3)-FucT and β(1. 2)-XylT transcripts respectively. Furthermore, we have demonstrated the “inhibiting” constructs realized from the M. Sativa β(1. 2)-XylT cDNA are able to induce the PTGS in a heterologous system: tobacco BY-2 cells.