Caractérisation fonctionnelle et moléculaire de progéniteurs épidermiques humains

Molecular and functional Characterization of human epidermal progenitor

• Auteur / Autrice : Gaëlle Larderet
• Direction : Gilles Waksman
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et moléculaire
• Date : Soutenance en 2005
• Etablissement(s) : Evry-Val d'Essonne

Mots clés

Mots clés contrôlés

Kératinocytes

Biologie moléculaire

Résumé

L'épiderme est un tissu en constant renouvellement dont la régénération est due à la présence de cellules souches à sa base. En raison du manque de marqueurs spécifiques des cellules souches épidermiques qui permettraient de les purifier, la biologie de ces cellules est mal connue. Or, le phénotype d'exclusion du Hœchst 33342, appelé SP, apparaît comme une caractéristique commune aux cellules souches de nombreux tissus adultes. Cette technique a donc été adaptée pour isoler une population SP à partir de kératinocytes humains en culture dont les identités cellulaire et moléculaire ont ensuite été étudiées. Ainsi, un kératinocyte SP possède un potentiel de prolifération suffisamment élevé pour régénérer la totalité de l'épiderme, propriété attribuée aux cellules souches de ce tissu. Parallèlement, une expérience d'hybridation sur puces à ADN a permis de mettre en évidence 41 gènes différentiellement exprimés, 37 gènes étant surexprimés dans les kératinocytes SP contre 4 gènes réprimés.

The aim of the present study was to characterize human progenitor cells isolated from primary keratinocyte cultures. For that purpose, the Hoechst exclusion assay described for haematopoietic cells was adapted to keratinocytes to isolate SP cells that exclude the dye. We show that SP cells represented an average of 0. 16 % of the total population. These keratinocytes exhibited a larger expansion potential in long-term cultures ; indeed, one SP cell can generate enough keratinocytes to cover the whole body. To further characterize SP cells, cDNA microarrays spotted with 9120 probes were used to identify their molecular signature. Transcriptome analysis showed that 41 genes were differentially expressed, with 37 up-regulated genes and only 4 down-regulated genes in SP cells. In conclusion, SP keratinocytes can be isolated from primary cultures of adult human epidermis. These cells exhibit a high proliferative potential and a specific gene expression profile.