Etude des protéines chaperons de la famille TorD dédiées à la maturation de molybdoenzymes

Study of the TorDchaperone family dedicated to the maturation of molybdoenzymes

• Auteur / Autrice : Marianne Ilbert
• Direction : Chantal Iobbi-Nivol
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie moléculaire et biotechnologies
• Date : Soutenance en 2005
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2
• Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université d'Aix-Marseille II. Faculté des sciences

Mots clés

Mots clés contrôlés

Escherichia coli

Molécules chaperonnes

Enzymes à molybdène

Résumé

J'ai décrit au cours de cette thèse une nouvelle famille de protéines chaperons de plus de trente membres impliquées spécifiquement dans la maturation de molybdoenzymes chez les procaryotes. La protéine TorD d'Escherichia coli, notre modèle, est impliquée dans la maturation cytoplasmique de TorA. En effet, TorD interagit directement avec la forme cytoplasmique non mature de TorA (apoTorA). Des études par mutagenèse dirigée laisse penser qu'une région hydrophobe de TorD serait impliquée dans cette interaction. De plus, nous avons montré par des systèmes de reconstitution in vitro que la présence de TorD augmente nettement l'efficacité d'incorporation du cofacteur à molybdène dans apoTorA. TorD induirait un changement conformationnel d'apoTorA qui favorise une conformation apte à acquérir le cofacteur à molybdène. Des études in vivo et in vitro effectuées sur d'autres membres de la famille TorD ont montré que ces chaperons sont spécifiquement dédiés à leur molybdoenzyme partenaire.

During my phD, I have described a new chaperone family containing more than thirty members. This family is involved in the maturation of molybdoenzymes in bacteria. The TorD protein of Escherichia coli, our model, is the specific chaperone of periplasmic molybdoenzyme TorA. I have shown that TorD is involved in cytoplasmic maturation of TorA. Indeed, TorD interacts with the cytoplasmic form of TorA (apoTorA). We have defined by directed mutagenesis a hydrophobic patch of TorD involved probably in this interaction. Moreover, I have developed an in vitro system to reconstitute the maturation step of apoTorA. This approach revealed that TorD is essential for a correct molybdenum cofactor insertion in apoTorA. The interaction TorA/TorD modifies the conformation of apoTorA probably to make it competent to receive the molybdenum cofactor. In vivo and in vitro studies on others members of the family showed that these chaperones present a high specificity toward their molybdoenzyme partners.