Thèse soutenue

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Auteur / Autrice : Philippe Leone
Direction : Christine KellenbergerAlain Roussel
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences de la vie et de la santé. Bioinformatique, biologie structurale et génomique
Date : Soutenance en 2005
Etablissement(s) : Aix-Marseille 1
Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université de Provence. Section sciences

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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Apres une infection microbienne, l'activation de la réponse immunitaire innée dans l'hémolymphe des insectes implique principalement deux familles de protéines: les récepteurs qui interagissent spécifiquement avec des motifs moléculaires à la surface de l'intrus, et les protéases à serines qui amplifient et régulent le signal par des cascades protéolytiques. J'ai utilisé différents systèmes d'expression (bactérie, levure, cellules d'insectes) pour produire quatre clip-trypsines de la drosophile afin de résoudre leur structure cristallographique. Ces protéases à serines de type trypsine possèdent au moins un court domaine N-terminal riche en cystéines, appelé ‘clip' et responsable de la régulation de l'enzyme. Le meilleur résultat a été obtenu avec les cellules SF9 qui expriment et sécrètent correctement la clip-trypsine CG9733. D'autre part, le domaine clip de CG16705 a été renaturé à partir de corps d'inclusion exprimés dans la bactérie. Dans le contexte d'une collaboration avec le laboratoire IBMC (Strasbourg) j'ai exprimé le récepteur PGRP-SD dans des cellules S2 et résolu sa structure cristallographique. Cette protéine de reconnaissance du peptidoglycane (PGRP) isolé chez la drosophile est un récepteur des bactéries Gram+, comme PGRP-SA. Les résultats suggèrent toutefois que les deux récepteurs reconnaissent différemment le peptidoglycane de ces bactéries, et qu'ils interagissent avec des corécepteursdifférents. Bien que le site de fixation du peptidoglycane soit conservé, la comparaison des structures de PGRP-SA et PGRP-SD montre des changements importants dans son environnement proche, en particulier dans la répartition des charges électrostatiques. De plus l'analyse des résidus de surface met en évidence une région non conservée entre les deux récepteurs et probablement impliquée dans l'interaction avec un co-récepteur, ainsi qu'une crevasse hydrophobe conservée chez toutes les PGRP