Exploration du genre Pycnoporus pour la production d'une nouvelle tyrosinase : de l'expression du gène aux applications biotechnologiques

Prospecting for the production of a new tyrosinase of biotechnological interest in the genus pycnoporus : from gene expression to applications

• Auteur / Autrice : Sonia Halaouli
• Direction : Jean-Claude Sigoillot, Moktar Hamdi
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 2005
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 1 en cotutelle avec Université de Tunis (1958-1988)
• Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université de Provence. Section sciences

Mots clés

Mots clés contrôlés

Réticulation (polymérisation)

Enzymes

Aspergillus niger

Tyrosinase

Résumé

Ce travail a eu pour objectif l'exploration des potentialités du genre Pycnoporus à synthétiser une nouvelle tyrosinase d'intérêt biotechnologique dans le domaine agro-alimentaire. Une nouvelle tyrosinase a été isolée, purifiée et caractérisée à partir de la souche P. Sanguineus BRFM49. Cette enzyme s'est révélée d'un grand intérêt pour la synthèse de molécules à haute valeur ajoutée comme des anti-oxydants ou des polymères de nouvelle génération. Deux voies complémentaires ont été explorées afin d'améliorer le niveau de production de la tyrosinase. La première, qui a consisté à sélectionner, par génétique classique, des lignées monocaryotiques génétiquement stables, n'a pas permis d'améliorer, de façon significative, l'activité tyrosinase chez P. Sanguineus BRFM49. La seconde a consisté à réaliser la production de la tyrosinase dans un système d'expression hétérologue. Pour cela, le gène de la tyrosinase (2204 pb) et l'ADNc correspondant (1857 pb) ont été clonés et caractérisés. La production hétérologue de la tyrosinase de P. Sanguineus a été réalisée chez un champignon hyper-producteur de protéines, Aspergillus niger. Pour cela, l'ADNc correspondant a été fusionné à la séquence d'adressage de la glucoamylase d'A. Niger et placé sous le contrôle d'un promoteur constitutif fort. Cette construction a permis de sécréter la protéine active dans le milieu extracellulaire. La souche A. Niger D15#26-e, présentant le meilleur niveau de production (50 mg/L), a été sélectionnée pour purifier et caractériser la tyrosinase recombinante et comparer celle-ci à l'enzyme native. Cette étude a montré que l'enzyme recombinante est aussi efficace que la tyrosinase native pour la réticulation de protéines modèles