Apport de la cytométrie en flux dans l'étude de la physiologie plaquettaire et de la modulation pharmacologique des fonctions plaquettaires

Contribution of flow cytometry in assessment of platelet physiology and drug-induced platelet function modulation

• Auteur / Autrice : Nathalie Hezard
• Direction : Philippe Nguyen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Médecine. Hématologie. Biomolécule et dynamique cellulaire
• Date : Soutenance en 2004
• Etablissement(s) : Reims

Mots clés

Mots clés contrôlés

Hématologie pédiatrique

Pédiatrie

Cytométrie de flux

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Plaquettes

Résumé

La @cytométrie en flux permet une approche innovante pour l'étude des fonctions plaquettaires. Cet outil permet en effet d'aborder en sang total la physiologie plaquettaire et sa modulation, notamment par des agents pharmacologiques. Ce travail aborde ces différents aspects. Dans une première partie, nous avons étudié la fonction plaquettaire en pédiatrie. Nous avons observé chez les enfants nouveaux-nés une diminution de l'activation plaquettaire en réponse au TRAP (diminution de l'activation d'aIIbb3, de l'internalisation de GPIb, et de la dégranulation). Nous n'avons pas identifié de profil caractérisant la prématurité. De façon inattendue, ces particularités persistent jusqu'à l'adolescence. La deuxième partie de ce travail est consacrée à l'étude de la modulation pharmacologique des fonctions plaquettaires chez le patient insuffisant coronarien. Nous avons utilisé parallèlement à la cytométrie en flux, l'agrégométrie en tant que test fonctionnel conventionnel, et le PFA-100, test évaluant les fonctions plaquettaires en conditions de flux élevé. Nous nous sommes intéressé au suivi biologique des traitements anti-GPIIbIIIa (abciximab, eptifibatide et tirofiban), des traitements par les thiénopyridines, et par l'aspirine, chez des patients pris en charge en salle de cathétérisme pour angioplastie. La troisième partie de ce document concerne la mise au point en cytométrie en flux, en comparaison avec le Western Blot, de l'étude de la phosphorylation de VASP (vasodilator-stimulated phosphoprotein), protéine intra-plaquettaire impliquée dans la signalisation inside-out. Les profils de phosphorylation de VASP chez des patients traités par clopidogrel montrent une variabilité interindividuelle importante dans la réponse au traitement.

@Flow cytometry is a promising tool in platelet function study. Flow cytometric assessment may be performed in whole blood, and provides data concerning platelet physiology and platelet function modulation induced by pharmacologic drugs. These different aspects are reported here. Firstly, we studied platelet functions in paediatrics. We observed in newborns a decrease of TRAP-induced platelet activation (decrease of aIIbb3 activation, GPIb internalisation, and degranulation). We did not identify a specific pattern in premature newborns. Unexpectedly, these peculiarities remains during childhood. Secondly, we studied platelet functions in coronary heart disease, using flow cytometry, aggregometry, and PFA-100, the latter using high shear stress conditions. We performed a biologic monitoring in patients treated with anti-GPIIbIIIa (abciximab, eptifibatide and tirofiban), thienopyridines, and aspirine. The third part concerns the assessment of VASP phosphorylation (vasodilator-stimulated phosphoprotein), using both a flow cytometric method and Western Blot. Clopidogrel-treated patients exhibited a wide inter-individual variability in VASP phosphorylation pattern.