Caractérisation des domaines fonctionnels de la glycoprotéine VI humaine, récepteur plaquettaire du collagène

Characterization of the functional domains of glycoprotein VI, a platelet collagen receptor

• Auteur / Autrice : Christelle Lecut
• Direction : Martine Jandrot-Perrus
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Pharmacie. Pharmacochimie, pharmacologie expérimentale et métabolisme
• Date : Soutenance en 2004
• Etablissement(s) : Paris 5
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale du Médicament (....-2009Paris)
• Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université Paris Descartes. Faculté de pharmacie de Paris (....-2019)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Hémostase

Activation plaquettaire

Collagène

Antagonistes

Glycoprotéines

Résumé

La glycoprotéine VI, récepteur plaquettaire du collagène, a un rôle critique dans l'activation plaquettaire et la formation du thrombus induite par une lésion vasculaire. Nous avons développé des anticorps monoclonaux dirigés contre la GPVI humaine. Leur caractérisation a abouti au développement d'un nouvel antagoniste des fonctions de GPVI in vitro: les fragments Fab de l'anticorps 9O12. Leur utilisation dans un modèle d'adhésion en flux a montré que GPVI est responsable de la formation d'agrégats, de l'exposition de phosphatidylsérine (PS) et de l'activation des intégrines a2b1 et aIIbb3 induites par l'adhésion au collagène. Nous avons de plus montré que le collagène potentialise la génération de thrombine déclenchée par le facteur tissulaire dans le plasma via l'exposition de PS couplée à GPVI. L'analyse de l'épitope de 9O12 a permis d'identifier des résidus de GPVI impliqués dans sa liaison au collagène. La Valine 54 et la Leucine 56 ont un rôle majeur dans cette interaction.

Glycoprotein VI is the main collagen receptor responsible for platelet activation and thrombus formation upon vascular injury. We have developed monoclonal antibodies directed against human GPVI. Their characterization led to the development of a new potent antagonist of GPVI functions in vitro: the Fab fragments of monoclonal antibody 9O12. By using 9O12 Fabs in an ex vivo model of thrombus formation in whole blood under flow, we demonstrated that GPVI is responsible for aggregate formation, phosphatidylserine (PS) exposure and activation of integrins a2b1 and aIIbb3 induced by platelet adhesion to collagen under arterial shear forces. We showed that collagen potentiates thrombin generation triggered by tissue factor in whole plasma via GPVI-coupled PS exposure. Analysis of the 9O12 epitope allowed the identification of residues within human GPVI involved in its binding to collagen: valine 54 and, to a lesser extent, leucine 56 are critical for GPVI-collagen interaction