Thèse soutenue

Analyse in situ de cellules imprégnées de photosensibilisants par ablation / ionisation laser couplée à la spectrométrie de masse : Application en thérapie photodynamique des cancers
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Auteur / Autrice : Natacha, Madeleine, Germaine Lourette
Direction : Jean-François Muller
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Chimie - Physique
Date : Soutenance en 2004
Etablissement(s) : Metz
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : LSMCL - Laboratoire de Spectrométrie de Masse et de Chimie Laser - EA 1094

Résumé

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A 5,10,15,20 meso(tetrahydroxyphényl)bacterio-chlorine (m-THPBC), la chlorine (m-THPC) et la porphyrine (m-THPP) équivalentes, sont employées comme agents photosensibles en thérapie photodynamique des cancers (PDT). Nos travaux ont été axés sur la m-THPC qui possède la plus grande activité photochimique. En vue d'une étude in vitro par MALDI-TOFMS, nous avons tout d'abord analysé ce photosensibilisant en milieu aqueux. Suite à une illumination laser à 650nm, les principales réactions observées ont été l'hydroxylation ou l'oxydation de la m-THPC et une déshydrogénation de la molécule en m-THPP. L'irradiation à 647,5 nm de la m-THPP a notamment révélé la formation de multimères covalents provenant de processus d'agrégations. Ces agrégats ont fait l'objet d'une étude structurale. Puis, nous avons utilisé une sonde chimique (DPBF) pour mettre en évidence la formation d'oxygène moléculaire singulet 1O2 pendant l'irradiation de la m-THPC. De la sorte, il a été montré tant en milieu éthanolique qu'aqueux, qu'une analyse MALDI-TOFMS permettait de caractériser simultanément la m-THPC, la DPBF et leurs photoproduits respectifs. Enfin pour comprendre les différents processus de photodégradation de la m-THPC in vitro, nous avons optimisé un protocole d'analyse par MALDI-TOFMS de cellules adhérentes intactes. Ainsi, nous avons identifié in situ des photoproduits oxydés et des traces de m-THPP, suite à l'irradiation par diode laser (652nm) de cellules incubées avec de la m-THPC (2µg/mL). L'extension de ce protocole à d'autres applications a permis de différencier de façon spécifique et reproductible différentes souches cellulaires cancéreuses par leur empreinte protéique.