Les mini-réplicons comme modèle d'étude de la réplication du virus de l'hépatite C

Development of Mini-replicons to Study Hepatitis C Virus Replication

• Auteur / Autrice : Estelle Dumas
• Direction : Michel Ventura
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et médicales. Biologie - Santé
• Date : Soutenance en 2004
• Etablissement(s) : Bordeaux 2

Mots clés

Mots clés contrôlés

Manipulation

Acides nucléiques

Cultures cellulaires

Reproduction (biologie)

Virus de l'hépatite C

Résumé

Bien que le virus de l'hépatite C ait été découvert en 1989, les mécanismes de sa réplication restent mal connus. Nous avons donc développé un modèle cellulaire pour l'étude de sa réplication. Les gènes codant pour les protéines non structurales du virus ont été intégrés dans génome de cellules HuH7. L'activité du complexe de réplication formé par ces protéines est mesurée à l'aide d'ARN rapporteur (mini-réplicons) dont l'expression est dépendante de leur réplication par ce complexe. Ces ARN possèdent le gène codant pour l'EGFP flanqué des régions 5' et 3' non traduites du virus. Lors de la mise en place de ce système, nous avons pu montrer l'existence de régions promotrices dans la séquence ADN correspondant au 5'UTR. D'autre part, nous avons pu mesurer des événements de réplication après 40 jours de culture. Ce système devrait constituer un modèle efficace pour étudier la réplication et tester de nouveaux inhibiteurs du VHC.

Even through the hepatitis C virus was discovered since 1989, its replication is still poorly known. Therefore, we established a cell based system to study its replication. Genes coding for HCV non structural proteins were integrated into the HuH7 cell genome in order to constitutively express the replication complex. To analyse its activity, RNA reporter (mini-replicons) were constructed. They contain at both ends HCV untranslated regions (5'UTR and 3'UTR). To quantify cells supporting RNA replication, we introduced EGFP coding genes between 5'UTR and 3'UTR. Only cells able to support mini-replicons replication will be fluorescent. During the development of this model, we demonstrated that DNA sequence corresponding to the HCV 5'UTR contains a promoter activity. Moreover, we could observe mini-replicons replication until 40 days of culture. This model will be useful to study HCV replication and effect of new drugs on HCV RNA synthesis.