= Etude des protéines des virus de la fièvre du Colorado, Eyach et Banna : application au diagnostic sérologique et à la caractérisation structurale des virions

Study of proteins of Colorado tick fever, Eyach and Banna viruses : application in serological diagnosis and the structural characterization of virions

• Auteur / Autrice : Fauziah Mohd Jaafar
• Direction : Xavier de Lamballerie
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Maladies transmissibles et pathologies tropicales. Virologie
• Date : Soutenance en 2004
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2

Mots clés

Mots clés contrôlés

ELISA

Diagnostic

Fièvre à tiques du Colorado

Protéines recombinées

Réoviridés

Résumé

Cette thèse rapport l'étude de deux groupes d'arbovirus de la famille de Reoviridae qui appartiennent aux genres Coltivirus et Seadornavirus. Les protéines recombinantes de ces virus ont été exprimées dans des systèmes bactériens dans le but d'établir des tests sérologiques pour le diagnostic de l'infection. Des anticorps dirigés contre les protéines recombinantes ont servi dans l'identification des protéines structurales et non structurales du banna virus, un virus responsable d'encéphalites chez les humains. Nous avons déterminé le nombre de copie des protéines structurales de ce virus. La structure de la protéine de la capside externe du Banna virus a été déterminée par diffraction aux rayons X à la résolution de 2. 6Aʿ. Cette même protéine porte les epitopes séroneutralisant. L'attachement du virus ne nécessite pas la présence d'acide sialique. La pré-incubation des cellules avec la VP9 trimeric augmente considérablement l'infectiosité du virus. Les activités de la guanylyltransferase virale ainsi qu'une protéine d'attachement a l'ARN bicaténaire ont été etudiés pour le Banna virus. D'autre part, la lecture à travers un codon stop, suspecté chez le virus de la fièvre du Colorado a été confirmé expérimentalement

This thesis focuses on the study two arbovirus groups within family Reoviridae. These are members of genera Coltivirus and Seadornavirus. Recombinant proteins of these viruses were expressed using bacterial expression systems in order to develop serological diagnostic assay for detection of antibodies against these viruses. In addition, antibodies against these recombinant proteins were subsequently used in identification of structural and non-structural proteins in virus particles. Enumeration of Banna virus structural proteins allowed estimation of protein copy numbers in the virion. The atomic structure of VP9 of Banna virus was resolved at 2. 6 Aʿ. VP9 of Banna was also identified as the sero-neutralizing protein. It was also discovered that sialic acid is not involved in the attachment of Banna virus to C6/36 cell and treatment of cells with cross-linked VP9 increased the infectivity of Banna virus to C6/36 cells. Banna virus proteins which are associated with guanylyltransferase and dsRNA binding activities were also determined. We also have confirmed the existence of read-through of an opal stop codon in segment 9 of Colorado tick fever virus