Etudes structurales des interactions CBP-récepteurs nucléaires
Auteur / Autrice : | Fabrice Klein |
Direction : | Jean Cavarelli |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biologie Moléculaire.Biochimie et Biologie Structurale |
Date : | Soutenance en 2003 |
Etablissement(s) : | Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008) |
Résumé
Les récepteurs nucléaires (NRs) forment une famille de facteurs de transcription dont l'activité est contrôlée par la fixation de ligands. La liaison à un ligand agoniste permet le recrutement de coactivateurs transcriptionnels, comme les p300/CREB‑BindingProtein (p300/CBP) et les p160/Steroid‑Receptor‑Coactivator (p160/SRC). Ces protéines possèdent plusieurs motifs LxxLL (L = Leucine ; X = n'importe quel acide aminé), responsables de l'interaction aux NRs. Nous avons caractérisé le domaine de CBP interagissant aux LBDs et co‑cristallisé un complexe de l'extrémité Nterminale de CBP (Nter‑CBP) et du LBD du Peroxisome Proliferator‑Activated Receptor gamma (lbd‑PPARg). La mauvaise qualité des cristaux de Nter‑CBP/lbd‑PPARg n'a pas permis de déterminer la structure du complexe. L'étude de Nter‑CBP par résonance magnétique nucléaire (RMN) montre que ce fragment isolé est peu structuré. Son interaction aux LBDs de trois NRs - PPARg, Retinoid X Receptor alpha (RXRa) et Estrogen Related Receptor gamma (ERRg) - a été étudiée par RMN. En raison d'une forte atténuation du signal des résidus impliqués dans l'interaction aux LBDs, la structure du fragment de mCBP en complexe à un LBD n'a pu être résolue, mais la zone d'interaction a été cartographiée : les résidus de CBP impliqués dans l'interaction représentent deux fragments discontinus, délimités par les acides aminés (31 à 38) et (61 à 80), la zone (61 à 80) contenant un LxxLL. L'interaction de fragments de CBP ou de SRCs aux LBDs de PPARg et RXRa a été étudiée de façon comparative par résonance plasmonique de surface (SPR) et par électrophorèse en conditions natives (N‑PAGE). Les résultats montrent l'existence d'interactions préférentielles entre RXRa et les SRCs, et entre PPARg et CBP. Les conclusions de nos travaux suggèrent que CBP puisse être recruté directement par l'hétérodimère PPARg/RXRa, ce qui pourrait jouer un rôle dans la permissivité de cet hétérodimère.