Elaboration d'une nouvelle génération d'hémoprotéines : couplage spécifique d'un cofacteur métalloporphyrinique sur un anticorps monoclonal
Auteur / Autrice : | Elodie Girgenti |
Direction : | Jean-Pierre Mahy |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Sciences biologiques |
Date : | Soutenance en 2003 |
Etablissement(s) : | Paris 11 |
Mots clés
Mots clés libres
Résumé
Une nouvelle approche a été proposée afin de préparer une nouvelle génération d'hémoprotéines, catalyseurs d'oxydations sélectives. Elle consiste à modifier un anticorps (Ac) anti-substrat, un anti-œstradiol, en lui greffant covalemment une métalloporphyrine, pour obtenir un système capable d'oxyder sélectivement des stéroi͏̈des. La principale difficulté de cette approche réside dans le contrôle de la fixation du cofacteur à proximité au site de liaison de l'Ac. Pour mener à bien cet objectif, une stratégie en 2 phases a été développée. La première phase a consisté à étudier un potentiel site de fixation du cofacteur à proximité du site de liaison de l'Ac. D'après la littérature, le choix s'est porté sur les lysines. Afin de répertorier les résidus potentiellement fonctionnalisables, un dosage préalable des lysines accessibles ainsi que des études structurales du paratope de l'Ac ont été réalisés. Après caractérisation de la structure primaire de ce domaine, il a été possible de réaliser une modélisation 3D de cette région permettant ainsi de visualiser les lysines les plus accessibles. La deuxième phase du projet a consisté à mettre au point une molécule permettant de coupler spécifiquement le cofacteur sur l'Ac, composée d'un motif antigénique, une testostérone, couplé à une métallo-méso-tétraarylporphyrine. Pour cela, une porphyrine disubstituée en ortho a été préparée afin de lier, d'un côté le stéroi͏̈de modifié et de l'autre, l'Ac anti-stéroi͏̈de au voisinage du site de reconnaissance de l'Ac. En parallèle, la testostérone a été modifiée dans le but de lui adjoindre un bras espaceur comportant un pont di sulfure qui se situera entre le stéroi͏̈de et le cofacteur. Ce pont disulfure utilisé comme fonction sécable permettra à la suite de sa réduction de relarguer la testostérone hors du site de reconnaissance de l'anticorps. L'étape finale de ce travail sera de coupler la métalloporphyrine à l'Ac afin d'étudier l'activité catalytique de ce nouveau biocatalyseur.