Facteurs d'hôtes influençant la sécrétion de protéines hétérologues chez Lactococcus lactis
Auteur / Autrice : | Sébastien Nouaille |
Direction : | Philippe Langella, Yves Le Loir |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Sciences biologiques |
Date : | Soutenance en 2003 |
Etablissement(s) : | Paris 11 |
Résumé
Les bactéries lactiques présentent une parfaite innocuité hygiénique et sont de bons candidats pour le développement de nouvelles utilisations. Dans le développement de vaccins vivants, la sécrétion peut être préférable à une production cytoplasmique. Nous avons étudié la sécrétion de protéines hétérologues chez Lactococcus lactis en employant la nucléase de S. Aureus comme protéine sécrétée modèle. Nous avons agi sur les facteurs intrinsèques de Nuc par l'utilisation d'un peptide signal de L. Lactis pour diriger la sécrétion et sur l'équilibre des charges de la partie N-terminale pour augmenter l'efficacité de sécrétion. Pour mieux comprendre la sécrétion chez L. Lactis, nous avons identifié des facteurs d'hôtes qui sont impliqués directement ou non dans la sécrétion. Par mutagenèse insertionnelle aléatoire nous avons identifié, puis analysé, deux nouveaux facteurs d'hôtes, dltA et ybdD. L'inactivation de dltA modifie les charges à la surface de la cellule et entraîne la rétention de Nuc sécrétée. L'inactivation de ybdD dérégule l'expression de gènes pouvant contrôler la sécrétion. Tous les composants de la machinerie Sec sont présents, à l'exception de SecDF. Chez B. Subtilis, SecDF maintient une forte capacité de sécrétion. La complémentation du sécrétome de L. Lactis par SecDF de B. Subtilis augmente la sécrétion. Afin d'évaluer la possible utilisation de L. Lactis comme vecteur de protéines immunogènes pour déclencher une réponse immune chez la souris, nous avons construit des souches de L. Lactis produisant une fusion entre Nuc et un épitope immunogène de la beta-lactoglobuline (Blg). La Blg est l'allergène majeur chez les nourrissons allergiques au lait de vache et constitue un bon modèle d'allergie alimentaire. L'administration orle des souches de L. Lactis produisant l'epitope declenche chez la souris une réponse immunitaire mucosale, non allergique, spécifique de la Blg.