Production d'anticorps monoclonaux dirigés contre la cocai͏̈ne, la méthamphétamine et leurs dérivés pour utilisation en clinique humaine

Production of monoclonal antibodies against cocaine, methamphetamine and derived for human clinical applications

• Auteur / Autrice : Yannic Danger
• Direction : Dominique Blanchard, Charles Tellier
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Médecine. Immunologie
• Date : Soutenance en 2003
• Etablissement(s) : Nantes
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale chimie biologie (Nantes....-2008)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Méthamphétamine

Cocaïne

Anticorps monoclonaux

Résumé

Le nombre d'intoxications aigue͏̈s à la cocai͏̈ne ou à la méthamphétamine est en constante augmentation. Parallèlement, aucune médication spécifique capable de neutraliser les effets neurotoxiques de ces drogues n'est actuellement disponible pour traiter les patients admis dans les services d'urgence. La société DrugAbuse Sciences, spécialisée dans le traitement des dépendances, a entrepris le développement d'anticorps monoclonaux capables de neutraliser in vivo les substances toxiques, avec l'objectif d'utilisation chez l'homme dans les cas d'overdoses. La première partie de ce travail a permis d'obtenir des anticorps monoclonaux murins spécifique de la cocai͏̈ne à partir d'un haptène breveté. Leur caractérisation a démontré leur forte affinité pour la cocai͏̈ne (de l'ordre de 108 M), mais également pour la coca-éthylène, composé plus toxique formé lors de l'ingestion de drogue et d'alcool. Les affinités pour les métabolites inactifs, tel que la benzoylecgonine, se sont révélées faibles, propriétés compatibles avec une utilisation thérapeutique. Six haptènes ont été générés pour l'obtention d'anti-méthamphétamine. La stratégie de couplage par la fonction amine a permis d'obtenir des anticorps d'affinité élevée (proche de 10 puissance8 M), alors que celle consistant à modifier la méthamphétamine au niveau du noyau aromatique n'a pas abouti à l'obtention d'anticorps monoclonaux stables. La stéréo-sélectivité des anticorps produits a également été étudiée en immunisant des souris soit avec des haptènes racémiques, soit avec des haptènes énantiomèriquement purs de forme S. L'utilisation de ces derniers augmente les chances d'obtenir des anticorps dirigées contre la S-méthamphétamine, forme la plus toxique. En conclusion, les propriétés des anticorps anti-cocai͏̈ne et anti-méthamphétamine produits au cours de cette thèse semblent compatibles avec l'objectif de neutralisation des drogues dans la circulation sanguine, et certains pourraient être de bons candidats pour mener des tests chez l'animal.

The number of overdose with cocaine or methamphetamine are in constant rising. Unfortunately, no specific medical treatment for the neutralisation of neurotoxic effects of these drug are avaible for the emergency treatment of patient. DrugAbuse Sciences, a biotech company dedicated to the medical treatment of dependencies, has developed a series of monoclonal antibodies to address this request. During the first part of this study, we obtained some cocaine-specific mouse monoclonal antibodies using a patented hapten. Their characterization have demonstrated their high affinity for the cocaine (in the range of 108M), and also with the cocaethylene, a toxic metabolite formed when drug and alcohol are taken concomitantly. The low affinity for the inactive metabolites, as the benzoylecgonine, suggest that the antibodies can be used for in vivo immuno neutralisation. Six additional hapten have been generated to obtain anti-methamphetamine antibodies. The coupling strategy was designed to obtain antibodies with high affinity (close to 10 8 M). However the modification of the methamphetamine by aromatic ring did not allow to obtain stable monoclonal antibodies. The stereo-selectivity of the product antibodies had been also studied by mouse immunization with racemic hapten, or with S enantiomeric hapten. We were able to demonstrate that stereo-specific hapten provoke the formation of stereo-selective antibodies, and should be preferably used. As a conclusion, in contrast with other antibodies reported in the literature, anti-cocaine and anti-methamphetamine obtained during this study are very good candidates for neutralisation of drugs within blood flow. Their potency should now be further investigated in animals with the goal to demonstrate their true ability to neutralise in vivo the drugs.