Caractérisation des variations structurales de la créatine kinase à l'aide de sondes spectroscopiques et de l'échange H/D couplé à la spectrométrie de masse

• Auteur / Autrice : Hortense Mazon
• Direction : Christian Vial
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie
• Date : Soutenance en 2003
• Etablissement(s) : Lyon 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Deutérium

Hydrogène

Repliement des protéines

Spectrométrie de masse

Protéines -- Dénaturation (chimie)

Créatine kinase

Résumé

Ce travail concerne un enzyme homodimérique, la créatine kinase cytosolique de muscle de lapin (CK-MM). L'utilisation combinée de méthodes biophysiques et de la technique d'échange H/D couplé à la protéolyse et à la spectrométrie de masse renseigne sur le processus de dépliement-repliement de la CK-MM dénaturée par le chlorure de guanidinium et sur sa dynamique structurale en présence ou non de substrats. La protéinase K clive la CK-MM en un segment N-terminal K1 et un segment C-terminal K2. L'analyse du repliement de cette protéine (K1K2)2 a permis de montrer que le domaine C-terminal joue un rôle essentiel dans la compaction finale de l'enzyme sous sa forme native. L'échange H/D a permis de caractériser un intermédiaire de dépliement, le globule fondu, comme ayant une structure très fluctuante. Il a aussi permis de montrer des changements structuraux importants de la CK-MM permettant un alignement des substrats lors de la formation du complexe analogue de l'état de transition.