Qualité du gamète mâle chez l'homme : place de l'aromatase et des estrogènes

• Auteur / Autrice : Sophie Lambard
• Direction : Serge Carreau
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Aspects moléculaires et cellulaires de la reproduction
• Date : Soutenance en 2003
• Etablissement(s) : Caen

Mots clés

Mots clés contrôlés

Protéines

ARN messagers

Récepteurs

Estrogènes

Aromatase

Cellules germinales

Spermatozoïdes

Homme

Résumé

La mobilité des spermatozoi͏̈des est considérée comme un des déterminants majeurs de la fertilité masculine. Dans une première approche, nous avons séparé la population de spermatozoi͏̈des mobiles de la population immobile d'un même échantillon et comparé l'expression de certains transcrits entre ces deux populations et observé des profils d'expression différents pour certains transcrits (eNOS, nNOS et protamine-1). De plus, nous avons démontré qu'il pouvait y avoir une activité traductionnelle dans le spermatozoi͏̈de humain (en particulier pour les transcrits codant pour c-myc). Des études plus approfondies seront nécessaires pour mieux comprendre la signification biologique de ces ARNms. Il est bien établi que les estrogènes jouent un rôle important dans la reproduction masculine. Ces hormones sont synthétisées par le cytochrome P450 aromatase (P450arom) et agissent via deux types de récepteurs (ER et ER ). Nous avons analysé la capacité du spermatozoi͏̈de humain et des cellules germinales à produire des estrogènes. Pour ce faire, nous avons recherché les transcrits de l'aromatase ainsi que la protéine. Nous avons démontré la présence d'ARNm codant pour l'aromatase par '' nested-PCR '' dans tous les échantillons de sperme purifiés sur gradient discontinu de Puresperm®. Nous avons détecté deux bandes en Western-blot (53 et 49 kDa) dans des préparations de microsomes obtenus à partir de spermatozoi͏̈des purifiés. A partir d'extraits de protéines totales, nous n'avons retrouvé que la bande à 49 kDa, avec une intensité du signal plus importante lorsque les échantillons de sperme utilisés contenaient des restes cytoplasmiques. Nous avons également mis en évidence une diminution significative (28 %) du rapport ARNm aromatase/GAPDH (glycéraldéhyde-3-phosphodéshydrogénase) dans les spermatozoi͏̈des immobiles comparé aux mobiles. Dans les cellules germinales immatures, nous avons détecté les ARNm de l'aromatase par RT-PCR et visualisé l'aromatase à 49 kDa en Western-blot. Nous avons ensuite recherché l'expression des récepteurs aux estrogènes. Les ARNms codant pour ER et ER ont été détectés en RT-PCR à la fois dans les spermatozoi͏̈des humains purifiés et dans les cellules germinales. De plus, nous avons identifié une isoforme de ER dépourvue de l'exon 4 dans les cellules germinales. En Western-blot, deux bandes ont été identifiées pour ER à 50 et 60 kDa, qui pourraient correspondre respectivement à la forme courte et à la forme longue de ER. Dans les spermatozoi͏̈des, nous n'avons pas détecté la protéine ER. Deux bandes ont également été détectées en Western-blot pour ER , une à la taille attendue (66 kDa) et une de taille plus faible (46 kDa). Dans le spermatozoi͏̈de , nous n'avons retrouvé que la bande à 46 kDa. Cette protéine pourrait correspondre à une isoforme de ER dépourvue de l'exon 1 et être à l'origine de l'action non génomique des estrogènes. Des études supplémentaires sont maintenant requises pour élucider les mécanismes d'action des estrogènes sur le spermatozoi͏̈de et les cellules germinales.