Thèse soutenue

Caractérisation d'un complexe supra-moléculaire natif interagissant avec le promoteur de la topoisomerase II α humaine

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Auteur / Autrice : Lilia Ben Slama
Direction : Pierre Oudet
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Date : Soutenance en 2002
Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Mots clés

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Résumé

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Les topoisomérases sont des enzymes ubiquitaires, hautement conservées à travers l'évolution, catalysant l'inter-convertion des isomères topologiques de l'ADN. De cette façon elles participent aux processus cellulaires dans lesquels est impliquée la double hélice d'ADN comme la réplication, la transcription, la condensation ou la séparation des chromosomes et la stabilité du génome. Elles sont également les cibles primaires d'un grand nombre d'agents anticancéreux utilisés en chimiothérapie comme les épipodophyllotoxines et les anthracyclines. Nous avons identifié au laboratoire une nouvelle protéine humaine appelée ICBP90 pour " Inverted CCAAT box Binding Protein of 90kDa " qui interagit avec la région promotrice de la topoisomérase IIa humaine. Afin d'étudier la fonction biologique de l'ICBP90, nous avons recherché ces partenaires à l'aide du système double-hybride. Les séquences amino-terminale de l'ICBP90 et carboxy-terminale de la protéine ont été employées séparément pour cribler une banque d'ADN complémentaire de lymphocytes T leucémiques (Clontech). Nous avons isolé plusieurs " clones positifs " dont les produits d'expression interagissent avec ICBP90. Ils codent pour des protéines nucléaires connues, impliquées dans différents mécanismes de contrôle de la transcription. Une de ces protéines candidates, interagissant avec l'extrémité amino-terminale de l'ICBP90 est aNAC pour " Nascent polypeptide-Associated Complex ", co-activateur de la transcription interagissant avec c-Jun et TBP. Les protéines RbAp48 pour " Retinoblastoma Binding Protein P48 " co-répresseur de la transcription, interagissant avec Rb, gène suppresseur de tumeurs et Tip60 pour " Tat Interacting Protein of 60kDa " co-activateur de la transcription interagissent avec l'extrémité carboxy-terminale de l'ICBP90. D'autres " clones positifs " ont été isolés, correspondant aux protéines MIF " Macrophage migration inhibitory factor ", facteur de prolifération cellulaire, septin6, interagissant avec MLL, SAS10 " Something About Silencing 10 " protéine impliquée dans la dérépression de la transcription et une protéine putative KIAA0683. L'analyse bio-informatique de ces séquences et la recherche des motifs potentiellement reconnus ont été réalisées. Les protéines aNAC, RbAp48 et Tip60 ont été surexprimées dans un système bactérien sous forme de protéine fusionnée à la GST " Glutathion-S-Transférase " afin de caractériser in vitro les interactions protéine-protéine. Les résultats obtenus par un test biochimique : le " GST pull-down assay " nous permettent une meilleure compréhension des mécanismes impliqués dans la régulation d'ICBP90 et de proposer qu'elle pourrait participer à la formation d'un complexe multi-protéique impliqué dans la régulation de la transcription du gène de la topoisomérase IIa humaine.